微生態(tài)制劑作為一種新型的綠色添加劑，近年來(lái)在動(dòng)物生產(chǎn)上的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，且生產(chǎn)效益顯著，主要分為乳酸菌類(lèi)微生態(tài)制劑、芽孢桿菌類(lèi)微生態(tài)制劑、酵母菌類(lèi)微生態(tài)制劑、光合細(xì)菌類(lèi)微生態(tài)制劑及復(fù)合微生態(tài)制劑等。釀酒酵母和地衣芽孢桿菌是較為常用的微生態(tài)制劑，具有提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率、改善瘤胃發(fā)酵、增強(qiáng)免疫力、提高反芻動(dòng)物生長(zhǎng)性能等作用，但二者組合應(yīng)用對(duì)反芻動(dòng)物生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化代謝及能量代謝方面的研究甚少，仍需進(jìn)一步探索。因此，本試驗(yàn)通過(guò)在飼糧中添加釀酒酵母和地衣芽孢桿菌探究其對(duì)綿羊生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化代謝及能量代謝的影響作用，旨在為釀酒酵母和地衣芽孢桿菌在肉羊飼糧中的合理添加提供理論依據(jù)。

試驗(yàn)于2018年1月1日至3月23日在山西省晉中市太谷縣山西農(nóng)業(yè)大學(xué)牧站進(jìn)行。

采用完全隨機(jī)分組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用4月齡、體重[(22.96±2.00)kg]相近、健康的杜泊×小尾寒羊雜交F1代公羔48只，隨機(jī)分為4組：D組（對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧）、D1組（在基礎(chǔ)飼糧中添加6×10¹⁰CFU/kg釀酒酵母）、D2組（在基礎(chǔ)飼糧中添加2×10¹⁰CFU/kg地衣芽孢桿菌）、D3組（在基礎(chǔ)飼糧中添加6×10¹⁰CFU/kg釀酒酵母＋2×10¹⁰CFU/kg地衣芽孢桿菌），每組12只。釀酒酵母購(gòu)買(mǎi)于安琪酵母股份有限公司，為顆粒狀制劑，實(shí)測(cè)活菌數(shù)為2×10¹⁰CFU/kg；地衣芽孢桿菌購(gòu)于天津坤禾生物科技集團(tuán)股份有限公司，為粉狀制劑，實(shí)測(cè)活菌數(shù)為2×10¹⁰CFU/kg?；A(chǔ)飼糧參考NRC（2007）綿羊營(yíng)養(yǎng)需要中體重20kg、日增重300g公羔的營(yíng)養(yǎng)需要配制，精粗比為60：40，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

試驗(yàn)羊舍為封閉式圈舍。試驗(yàn)開(kāi)始前用消毒液對(duì)羊舍的地面、羊欄、食槽等噴灑消毒。所有試驗(yàn)羊經(jīng)檢疫驅(qū)蟲(chóng)后，打好耳標(biāo)。試驗(yàn)羊均單欄飼養(yǎng)，每天分別于08：00和18:00進(jìn)行飼喂，自由采食和飲水。預(yù)試期15d，正試期60d。

正試期內(nèi)每天準(zhǔn)確稱(chēng)量記錄每只試驗(yàn)羊的喂料量和剩料量，計(jì)算平均日采食重[ADFI，非干物質(zhì)（DM）基礎(chǔ)]。在正試期第1、30、60天晨飼前對(duì)試驗(yàn)羊進(jìn)行稱(chēng)重，計(jì)算平均日增重（ADG）。根據(jù)ADFI和ADG計(jì)算料重比（F/G）。

正試期結(jié)束后，采用全收糞收尿法，將所有試驗(yàn)羊置于自制消化代謝籠中飼養(yǎng)，預(yù)試期4d，試驗(yàn)期3d。

晨飼前收集每只羊24h所排全部糞便，并稱(chēng)重記錄。連續(xù)收集3d，按排糞量的10%四分法取樣，記錄糞樣重。一部分糞樣加入10%的硫酸（每100g糞樣加10mL 10%的H2SO4）固氮，充分混勻后置于-20℃保存，用于測(cè)定蛋白質(zhì)含量；一部分糞樣直接置于-20℃保存，用于測(cè)定其他常規(guī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量和糞能。

于采樣前1天向每只尿桶中加入100mL 10%的硫酸固氮，晨飼前收集每只羊24h所排全部尿液，用量筒量其體積并記錄。將尿樣搖勻后，經(jīng)4層紗布過(guò)濾，按1/10取樣，連續(xù)收集3d，將樣品充分混勻后置于-20℃保存，用于測(cè)定尿氮、尿酸、尿囊素、黃嘌呤、次黃嘌呤含量和尿能。

參考AOAC（2000）方法測(cè)定飼糧的DM、粗灰分（Ash）、粗脂肪（EE）和粗蛋白質(zhì)（CP）含量；參考Van Soest等方法測(cè)定飼糧的中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維（ADF）含量；采用原子吸收分光光度計(jì)法測(cè)定飼糧中鈣（Ca）含量；采用釩鉬黃比色法測(cè)定飼糧中磷（P）含量。

將糞樣置于恒溫鼓風(fēng)干燥箱中，65℃烘干48h，回潮24h后稱(chēng)重，計(jì)算得出初水分含量。粉碎過(guò)40目篩后用于測(cè)定營(yíng)養(yǎng)成分含量（同1.6.1）。參考楊勝的方法測(cè)定飼糧、糞樣和尿樣中的氮含量。相關(guān)計(jì)算公式如下：

某營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率（%）=（食入該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)質(zhì)量-糞中該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)質(zhì)量）/食入該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)質(zhì)量×100（計(jì)算時(shí)已減去剩料中該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)質(zhì)量）；

氮表觀消化率（%）=（攝入氮-糞氮）/攝入氮×100；

沉積氮（g/d）=攝入氮-糞氮-尿氮；

氮沉積率（%）=沉積氮/攝入氮×100。

飼糧、糞樣和尿樣的總能用氧彈量熱儀（TJHY-5000，天健電子科技有限公司）測(cè)定。對(duì)于飼糧和糞樣能量的測(cè)定，取5張稱(chēng)量紙稱(chēng)重后分別測(cè)定能值，計(jì)算出稱(chēng)量紙的平均能值，稱(chēng)取0.9～1.1g（精準(zhǔn)到0.0002g）的待測(cè)樣品，再用稱(chēng)量紙包緊放于燃燒皿中（由于樣品較輕，燃燒時(shí)易于飛濺）測(cè)定能值，減去稱(chēng)量紙能值即可得到待測(cè)樣品的能值。對(duì)于尿能的測(cè)定，取5張定量濾紙稱(chēng)重后分別測(cè)定能值，計(jì)算出濾紙的平均能值，將1mL尿液滴在濾紙上，65℃烘干后測(cè)定能值，減去濾紙能值即可得到尿能。

甲烷產(chǎn)量使用MA-10甲烷分析儀（Sable Systems International，亨德森，美國(guó)）測(cè)定。將試驗(yàn)羊的頭部固定在小型反芻動(dòng)物專(zhuān)用的聚碳酸酯頭箱中，每日正常飼喂后密封頭箱，適應(yīng)24h后，進(jìn)行24h實(shí)時(shí)測(cè)定。利用標(biāo)準(zhǔn)氣將MA-10甲烷分析儀校準(zhǔn)后，通過(guò)Sable開(kāi)路式呼吸測(cè)熱系統(tǒng)采集并計(jì)算數(shù)據(jù)，即得到甲烷產(chǎn)量。相關(guān)計(jì)算公式如下：

總能（MJ/d）=每天食入飼糧的總能量；

甲烷能（MJ/d）=甲烷產(chǎn)量×單位體積甲烷能量（39.5kj/L）×1000；

總能表觀消化率（%）=表觀消化能/總能×100。

參考Chen等方法，利用紫外分光光度計(jì)（UV-1800PC，上海美譜達(dá)儀器有限公司）測(cè)定黃嘌呤、次黃嘌呤和尿囊素含量，利用酶標(biāo)儀測(cè)定尿酸含量，根據(jù)尿嘌呤衍生物（PD）含量計(jì)算MCP含量。計(jì)算公式如下：

MCP（g/d）=（尿囊素＋尿酸＋黃嘌呤＋次黃嘌呤）×70×6.25/（0.116×0.83×1000）。

數(shù)據(jù)用EXCEL 2010進(jìn)行初步整理，采用SPSS22.0進(jìn)行單因素方差分析，當(dāng)差異顯著時(shí)用Dun-can氏法進(jìn)行多重比較，以P<0.05 表示差異顯著。

由表2可知，添加釀酒酵母和地衣芽孢桿菌對(duì)試驗(yàn)羊的終末體重及平均日采食量的影響均不顯著（P>0.05）。D3組的ADG顯著高于D組（P<0.05）。與D組相比，D1、D2和D3組的F/G分別顯著降低了9.87%、9.12%和31.14%（P<0.05），但D1和D2組之間差異不顯著（P>0.05）。

由表3可知，D3組的DM、OM、NDF和ADF表觀消化率顯著高于D組（P<0.05），分別提高了9.64%、8.86%、9.27%和3.47%，但D1和D2組之間均差異不顯著（P>0.05）。

由表4可知，飼糧中添加釀酒酵母和地衣芽孢桿菌對(duì)攝入氮、糞氮和尿氮的影響不顯著（P>0.05），對(duì)氮表觀消化率、沉積氮和氮沉積率影響顯著（P<0.05）。D3 組的氮表觀消化率、沉積氮和氮沉積率與D組相比分別顯著提高了12.04、41.39和40.95（P<0.05），D1和D2組之間均差異不顯著（P>0.05）。

由表5可知，飼糧中添加釀酒酵母和地衣芽孢桿菌對(duì)尿酸含量沒(méi)有顯著影響（P>0.05），但對(duì)尿囊素、黃嘌呤和次黃嘌呤、總尿嘌呤衍生物和MCP含量的影響顯著（P<0.05）。D1、D2和D3組的尿囊素、黃嘌呤和次黃嘌呤和MCP含量均顯著高于D（P<0.05）。D3組總尿嘌呤衍生物含量顯著高于D組（P<0.05），但與D2和D3組之間差異不顯著（P>0.05）。

由表6可知，飼糧中添加釀酒酵母和地衣芽孢桿菌對(duì)攝入總能、表觀消化能和總能表觀消化率的影響均不顯著（P>0.05），對(duì)糞能、尿能和甲烷能影響顯著（P<0.05）。D組的糞能和尿能均顯著高于其他3組（P<0.05），D組的甲烷能顯著高于D3組（P<0.05）。

前人研究表明，益生菌對(duì)動(dòng)物機(jī)體消化道微生物及其功能有改善作用，可以促進(jìn)小腸發(fā)育，有利于維持幼齡反芻動(dòng)物小腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，并且酵母菌和芽孢桿菌在反芻動(dòng)物消化道內(nèi)可代謝產(chǎn)生多種酶類(lèi)和非特異性免疫調(diào)節(jié)因子，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和B族維生素等，還可以增加瘤胃蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶的活性，這些物質(zhì)能降解飼料中的碳水化合物，促進(jìn)纖維素的消化，提高動(dòng)物對(duì)飼料的利用率，從而促進(jìn)機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，提高動(dòng)物的生長(zhǎng)速度。另有報(bào)道表明，益生菌可以提高奶牛血清總抗氧化能力，降低丙二醛含量，增加機(jī)體抗應(yīng)激能力，從而減少機(jī)體因應(yīng)激而產(chǎn)生的損耗。因此，

本試驗(yàn)中飼糧中添加不同益生菌可能改善機(jī)體的消化機(jī)能和健康狀況，對(duì)綿羊的生長(zhǎng)均產(chǎn)生了積極的影響。

楊春濤等研究證明，飼糧中添加地衣芽孢桿菌及其復(fù)合菌可以提高斷奶應(yīng)激條件下?tīng)倥Ａ鑫竝H的穩(wěn)定性，改善瘤胃發(fā)酵狀況，豐富瘤胃纖維分解菌種類(lèi)并增加瘤胃內(nèi)優(yōu)勢(shì)菌群數(shù)量，因此促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在瘤胃內(nèi)的降解和利用。Masuccli等研究表明，飼糧中添加釀酒酵母或地衣芽孢桿菌可以提高犢牛的生長(zhǎng)性能和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率。DM、OM、NDF和ADF消化率是衡量動(dòng)物對(duì)飼糧消化利用程度的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)中同時(shí)添加釀酒酵母和地衣芽孢桿菌使得DM、NDF、ADF和OM表觀消化率均高于對(duì)照組，且對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的ADG和FG效果最佳，說(shuō)明2種益生菌能提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率，最終起到促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的作用。從生長(zhǎng)性能來(lái)看，組合飼喂具有協(xié)同作用，且效果最佳。但也有報(bào)道提出飼喂釀酒酵母和地衣芽孢桿菌對(duì)生長(zhǎng)性能沒(méi)有顯著的改善作用，可能是因?yàn)樘砑铀?、試?yàn)環(huán)境、試驗(yàn)動(dòng)物或者試驗(yàn)飼糧組成等因素造成的。

反芻動(dòng)物的代謝蛋白質(zhì)主要由小腸可吸收飼糧蛋白質(zhì)和小腸可吸收MCP組成。瘤胃微生物利用飼糧中的碳水化合物和含氮物質(zhì)的降解產(chǎn)物合成MCP，MCP中75%～85%的氮以蛋白質(zhì)、肽或游離氨基酸形式存在，15%～25%的氮存在于核酸中，核酸被降解形成的嘌呤進(jìn)入小腸黏膜，最終以嘌呤衍生物的形式從尿中排出，因此通常利用尿嘌呤衍生物的含量間接推算MCP合成量。

本試驗(yàn)中，添加釀酒酵母組和地衣芽孢桿菌組的氮表觀消化率、氮沉積率和MCP含量均高于對(duì)照組，可能是釀酒酵母促進(jìn)瘤胃微生物的生長(zhǎng)和繁殖，使其對(duì)氮的利用率提高，通過(guò)肝臟轉(zhuǎn)變?yōu)槟蛩氐牧繙p少，排出的糞氮濃度降低，這與前人的研究結(jié)果相似；并且地衣芽孢桿菌在胃腸道定植后具有一定的固氮能力，可以提高含氮物質(zhì)的利用率，從而提高M(jìn)CP的合成及減少糞氮尿氮的排出。2種益生菌同時(shí)添加的效果均好于單獨(dú)添加，說(shuō)明二者之間具有協(xié)同效應(yīng)，但具體的互相作用機(jī)制還需進(jìn)一步探究。

有研究表明，反芻動(dòng)物在消化過(guò)程中，總能攝入量的增加可能會(huì)導(dǎo)致糞能的相應(yīng)增加。飼糧在瘤胃中發(fā)酵產(chǎn)生大量的甲烷（CH4），從而造成飼糧總能損失2%～15%。本試驗(yàn)中，添加釀酒酵母和地衣芽孢桿菌對(duì)表觀消化能和總能表觀消化率均沒(méi)有顯著影響，雖然總能攝入量差異不顯著，但是對(duì)照組的糞能和尿能的排出量顯著高于試驗(yàn)組，說(shuō)明添加益生菌對(duì)能量的利用產(chǎn)生了積極作用。添加釀酒酵母和地衣芽孢桿菌降低了甲烷能可能是因?yàn)獒劸平湍缚梢源碳ひ宜嵘删鷮?duì)氫的利用，從而減少CH4的排放；地衣芽孢桿菌在一定條件下可以產(chǎn)生脂肽類(lèi)、磷脂類(lèi)、多烯類(lèi)和氨基酸類(lèi)等多種抗生素，減少甲烷菌和產(chǎn)氫菌的數(shù)量，提高動(dòng)物機(jī)體的抵抗力，從而促進(jìn)機(jī)體的新陳代謝，減少CH4的合成和對(duì)環(huán)境的應(yīng)激，所以提高了能量利用率。二者共同作用相比較于單獨(dú)添加能夠更有效地提高能量利用率，減少甲烷能、糞能和尿能，說(shuō)明益生菌復(fù)合應(yīng)用后在動(dòng)物消化道內(nèi)表現(xiàn)為協(xié)同效應(yīng)。本試驗(yàn)雖然證明釀酒酵母和地衣芽孢桿菌可以提高綿羊?qū)︼暭Z中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和能量的利用率，但其詳細(xì)具體的作用機(jī)理仍需要進(jìn)一步研究。

本試驗(yàn)購(gòu)買(mǎi)的釀酒酵母為45元/kg，地衣芽孢桿菌為25元/kg，試驗(yàn)中的添加劑量分別為3和1g/kg飼糧。根據(jù)育肥出欄羊現(xiàn)行價(jià)格每kg活重28元，試驗(yàn)天數(shù)為60d，每只羊平均采食量為1.77kg/d計(jì)算，對(duì)照組的每只試驗(yàn)羊增加的出欄活重價(jià)值為471.24元。僅飼喂釀酒酵母組和僅飼喂地衣芽孢桿菌組的每只試驗(yàn)羊增加的出欄活重價(jià)格分別為498.96和485.52元，同對(duì)照組相比分別增加了27.72和14.28元，增加的投入分別為14.34和2.66元，投入產(chǎn)出比（增加的出欄活重價(jià)值/增加的投入）分別為1.93和5.38。同時(shí)添加2種菌的試驗(yàn)組，每只試驗(yàn)羊增加的出欄活重價(jià)格為567.28元，同對(duì)照組相比增加了96.04元，增加的投入為16.99元，投入產(chǎn)出比為5.68。本試驗(yàn)中，同時(shí)添加2種菌的試驗(yàn)組的投入產(chǎn)出比最高，經(jīng)濟(jì)效果最好。

飼糧中單獨(dú)添加6×10¹⁰CFU/kg釀酒酵母和2×10¹⁰CFU/kg地衣芽孢桿菌可以對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化代謝和能量代謝產(chǎn)生積極影響，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和能量的利用率，促進(jìn)動(dòng)物消化吸收，從而改善綿羊的生長(zhǎng)性能。在本試驗(yàn)中釀酒酵母（6×10¹⁰CFU/kg）＋地衣芽孢桿菌（2×10¹⁰CFU/kg）組合飼喂效果更加顯著。

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