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1）復(fù)合益生菌發(fā)酵效果分析。大量研究和應(yīng)用案例表明，微生物發(fā)酵飼料具有無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)，具體表現(xiàn)在：①微生物發(fā)酵能夠有效去除飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，如胰蛋白酶抑制因子、大豆球蛋白等，同時(shí)生物活性物質(zhì)含量明顯提升，具有代表性的有益生菌、蛋白酶和小分子肽等，最終大大提升飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值；②提升飼料的適口性，增加動(dòng)物采食量。飼料經(jīng)過(guò)微生物發(fā)酵后，不容易消化的粗蛋白和大分子淀粉，通過(guò)微生物和有益菌群的分解轉(zhuǎn)化，變?yōu)楦尤菀孜盏男》肿影被岷途S生素。飼料的適口性提升和動(dòng)物采食量增加主要依據(jù)就是粗纖維的減少；③污染物含量降低，細(xì)菌疾病得到控制。發(fā)酵后的飼料更容易被動(dòng)物吸收，所以糞便中的氮、磷、鈣等含量降低，更進(jìn)一步地降低糞便臭味，與此同時(shí)飼料中蛋白質(zhì)分解為氨氣的比重得以降低，減少對(duì)環(huán)境的污染。

2）發(fā)酵飼料研究。分解酶、多種微生物活菌等高效生物因子的作用分析如下。傳統(tǒng)飼料中的纖維素、半纖維素等大分子纖維、各類木質(zhì)素、木聚糖長(zhǎng)分子鏈被分解為小分子，最終的目的是將高分子碳水化合物等不能被動(dòng)物直接吸收的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化分解為低分子碳水化合物，提升飼料能量的利用率。此外，有機(jī)氮、無(wú)機(jī)氮等難以被動(dòng)物利用的物質(zhì)，在微生物活菌的作用下轉(zhuǎn)化成營(yíng)養(yǎng)成分較高的多種菌體蛋白質(zhì)?，F(xiàn)階段，我國(guó)益生菌發(fā)酵飼料主要有固態(tài)、液態(tài)和固態(tài)表面吸附發(fā)酵3 種方式。固態(tài)發(fā)酵技術(shù)使用幾乎不含游離水的固態(tài)培養(yǎng)基進(jìn)行操作，該項(xiàng)技術(shù)歷史悠久，在20 世紀(jì)90 年代提出的新型固態(tài)發(fā)酵技術(shù)具有能源消耗低、發(fā)酵設(shè)備結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、后期處理便捷等優(yōu)勢(shì)，得到廣泛的應(yīng)用。液態(tài)發(fā)酵利用液態(tài)的發(fā)酵介質(zhì)進(jìn)行，美國(guó)科學(xué)家提出的液態(tài)深層發(fā)酵技術(shù)是應(yīng)用較為廣泛的技術(shù)。與此同時(shí)，我國(guó)科研工作者研發(fā)的分離耦合液態(tài)發(fā)酵技術(shù)和生物反應(yīng)器發(fā)酵技術(shù)已經(jīng)取得重大攻關(guān)成果。

微生物有很多種類，其生物學(xué)特征也多不相同，但任何一種用于發(fā)酵飼料的微生物都必須在生物學(xué)和遺傳學(xué)特性上保證其安全性和穩(wěn)定性。因此，實(shí)際應(yīng)用中必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的病理、毒理試驗(yàn)，充分證明其無(wú)毒、無(wú)害、無(wú)耐藥性等副作用后才可以使用。目前，細(xì)菌、酵母菌、放線菌和絲狀真菌中的許多菌種都已經(jīng)用于飼料生產(chǎn)。最常用的主要有乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌、米曲霉、黑曲霉以及某些放線菌和光合細(xì)菌等。

微生物之間的相互作用較為復(fù)雜，復(fù)合菌種發(fā)酵的目的就是利用不同微生物之間的協(xié)同互補(bǔ)效應(yīng)，發(fā)揮正組合的最佳效果。本試驗(yàn)選擇的復(fù)合菌，目的是能夠?qū)⒋蠓肿拥牡矸邸⒌鞍踪|(zhì)和纖維素降解為容易被吸收的小分子物質(zhì)。通過(guò)調(diào)研國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究結(jié)果，同時(shí)結(jié)合我國(guó)飼料供應(yīng)廠家的現(xiàn)實(shí)應(yīng)用情況，確定乳酸菌、芽孢桿菌和酵母菌為復(fù)合發(fā)酵菌種。相比于單一菌種，復(fù)合益生菌的發(fā)酵效果得到顯著提升。

1）試驗(yàn)方法。按黃玉米39%、小麥粉21%、菜籽粕14%和豆粕26%的比例混合發(fā)酵原料。復(fù)合益生菌發(fā)酵液主要成分是乳酸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌。普通瓊脂的配制：營(yíng)養(yǎng)瓊脂32g，加水至1L，121℃下滅菌20min。

發(fā)酵工藝具體操作流程：首先在發(fā)酵原料中接種不同比例和濃度的復(fù)合益生菌，然后加入不同量的自來(lái)水調(diào)節(jié)發(fā)酵水分，在拌勻后采樣裝入密封的錫箔袋，最后放入特定條件的培養(yǎng)箱發(fā)酵培養(yǎng)，按要求采樣檢測(cè)，流程如圖1所示。

從發(fā)酵產(chǎn)物質(zhì)地進(jìn)行分析，可以看出，在發(fā)酵的初期呈現(xiàn)較弱的酸味，第3天為質(zhì)地明顯改善的時(shí)候，散發(fā)芳香味，同時(shí)顏色變?yōu)榻瘘S色，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，品質(zhì)逐漸變差，氣味由芳香轉(zhuǎn)變?yōu)榇瘫堑乃嵛叮a(chǎn)物顏色加深。

6）復(fù)合益生菌發(fā)酵飼料工藝參數(shù)確定。飼料經(jīng)過(guò)復(fù)合益生菌的發(fā)酵，難以消化的大分子物質(zhì)減少，同時(shí)容易被吸收的氨基酸等小分子物質(zhì)增多，在微生物發(fā)酵過(guò)程中，產(chǎn)生了大量的有益微生物和乳酸，飼料的可消化性得到提升，與此同時(shí)，發(fā)酵過(guò)程伴隨著氣體的產(chǎn)生和釋放，這表明一部分能量被消耗，飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的消耗程度通過(guò)干物質(zhì)回收率指標(biāo)表示。干物質(zhì)回收率越高，表示碳水化合物、礦物質(zhì)和蛋白質(zhì)的降解損失越少，發(fā)酵損失越少。但是該項(xiàng)指標(biāo)在青儲(chǔ)飼料中應(yīng)用較多，在發(fā)酵飼料中作為評(píng)價(jià)指標(biāo)的情況較少。最終，本試驗(yàn)確定乳酸菌數(shù)、pH值、感官評(píng)定指標(biāo)和銨態(tài)氮作為主要的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

通過(guò)上述主要影響因素的分析，可以看出，在發(fā)酵溫度、接種量和水分含量均較低的情況下，乳酸菌數(shù)量維持在低水平，同時(shí)pH較高，不適合作為最佳工藝參數(shù)。在5%接種量時(shí)，乳酸菌和銨態(tài)氮指標(biāo)與低接種量無(wú)明顯差異，但是明顯優(yōu)于更高接種量情況；高水分條件下，銨態(tài)氮含量增加；發(fā)酵時(shí)間對(duì)于產(chǎn)品品質(zhì)的影響如前文所述。