1.1 試驗材料

青貯原料為來自山東省陽信縣河流鎮(zhèn)蠟熟期刈割的全株玉米(登海605)，全株玉米青貯前營養(yǎng)成分見表1。乳酸菌制劑主要成分為戊糖片球菌、屎腸球菌、植物乳桿菌和布氏乳桿菌，乳酸菌含量為5×1010CFU/g。甲酸、乙酸、丙酸、苯甲酸鈉和山梨酸鉀均為實驗室用分析純試劑，購自國藥集團化學試劑有限公司。纖維素酶(綠色木酶，又稱1，4-β-D-葡聚糖葡糖苷水解酶，活性為400000U/g)購自上海源葉生物科技有限公司。聚乙烯單向呼吸閥厭氧袋(22cm×40cm)購自平陽勝光實業(yè)有限公司。

1.2 試驗設(shè)計

全株玉米用粉碎機切短至1～2cm，混合均勻后備用。試驗共設(shè)5個組，分別為對照組(不添加任何青貯添加劑)、乳酸菌組(添加5×105CFU/g乳酸菌制劑)、有機酸組(甲酸、乙酸和丙酸按照7∶1∶2的體積比進行混合，添加量為4mL/kg)、有機酸鹽組(苯甲酸鈉和山梨酸鉀按照1∶1的質(zhì)量比進行混合，添加量為2g/kg)和纖維素酶組(添加50mg/kg纖維素酶)，添加劑的添加量均以青貯鮮重為基礎(chǔ)，每組4個重復(fù)。各組混合均勻后，稱取約1kg樣品于聚乙烯厭氧袋中，真空密封，于室溫避光發(fā)酵45d后開袋取樣，隨后開展相關(guān)指標的測定。

1.3 指標測定

1.3.1 常規(guī)營養(yǎng)成分指標

全株玉米青貯前和開袋后分別取約500g樣品，在65℃烘箱(DHG－9053A型)中烘干48h，采用粉碎機(Tecator 1093，瑞典)粉碎至1mm待測。干物質(zhì)(DM)、粗灰分(Ash)、粗蛋白質(zhì)(CP)和粗脂肪(EE)含量參照AOAC(2005)方法進行測定，其中DM含量采用重量法測定，Ash含量含量采用灰化法測定，CP含量采用凱氏定氮法測定，EE含量采用索氏浸提法(乙醚浸出法)測定。

鈣(Ca)含量參照GB/T 6436—2018，采用高錳酸鉀法測定。磷(P)含量參照GB/T 6437—2018，采用分光光度法測定。中性洗滌纖維(NDF)、酸性洗滌纖維(ADF)和酸性洗滌木質(zhì)素(ADL)含量參照Van Soest等的方法，采用Ringbio纖維分析儀(R－2000，英國)測定。水溶性碳水化合物(WSC)含量參照蒽酮－硫酸比色法，采用分光光度計(Alpha－1506，上海)進行測定。淀粉(Starch)含量采用高氯酸水解－蒽酮比色法測定。相對飼喂價值(RFV)根據(jù)公式進行計算:

RFV=DMI(%BW)×DDM(%DM)/1.29;

DMI(%BW)=120/NDF(%DM);

DDM(%DM)=88.9－0.779×ADF(%DM)。

式中:DMI為干物質(zhì)采食量;BW為體重;DDM為可消化干物質(zhì)。

1.3.2 碳水化合物組分指標

碳水化合物組分剖分參照NＲC(2016)的方法，各組分計算公式如下:

總碳水化合物(CHO，%DM)=100－CP(%DM)－EE(%DM)－Ash(%DM);

非中性洗滌纖維性碳水化合物(Non－NDF，%DM)=100－CP(%DM)－NDF(%DM)－EE(%DM)－Ash(%DM);

有機酸(OA，%DM)=乳酸(%DM)+乙酸(%DM)+丙酸(%DM)+丁酸(%DM)+其他有機酸(%DM);

不可利用纖維(CC，%DM)=ADL(%DM)×2.4;

可溶性糖(CA，%DM)=WSC(%DM);

淀粉(CB1，%DM)=Starch(%DM);

中性洗滌可溶纖維(CB2，%DM)=Non－NDF(%DM)－OA(%DM)－CA(%DM)－CB1(%DM);

不可利用中性洗滌纖維(CC，%DM)=2.4×ADL(%DM);

可利用中性洗滌纖維(CB3，%DM)=NDF(%DM)－CC(%DM)。

1.3.3 預(yù)測能值指標

總可消化養(yǎng)分(TDN)根據(jù)Weiss等的方法計算，計算公式如下:

TDN(%)=0.98×(100－NDFn－CP－Ash－EE)+0.93×CP+2.25×(EE－1)+0.75×(NDFn－ADL)×［1－(ADL/NDFn)0.667］－7;

式中:NDFn為無氮中性洗滌纖維［NDFn=NDF－中洗不溶蛋白(NDICP)］;各組分的單位均為%DM。

消化能(DE)、代謝能(ME)、維持凈能(NEm)和增重凈能(NEg)參照NＲC(2016)，在TDN基礎(chǔ)上進行計算，公式如下:

DE(MJ/kg)=0.04409×TDN(%DM);

ME(MJ/kg)=0.82×DE(MJ/kg);

NEm(MJ/kg)=1.37×ME(MJ/kg)－0.138×ME2(MJ/kg)+0.0105×ME3(MJ/kg)－1.12;

NEg(MJ/kg)=1.42×ME(MJ/kg)－0.174×ME2(MJ/kg)+0.0122×ME3(MJ/kg)－1.65。

泌乳凈能(NEL)根據(jù)Undersander的方法進行計算，公式如下:

NEL(MJ/kg)=［0.9265－(0.00793×ADF)］/0.4536。

1.3.4 發(fā)酵指標

稱取25g新鮮青貯樣品，置于榨汁機(HR2027，飛利浦)中，加入250mL無菌蒸餾水，間歇榨汁攪拌5～6次，每次5s。用4層紗布過濾上清液至三角瓶中，混勻，立即使用pH計(HANNA HI 9125，意大利)測定pH，隨后使用0.1mol/LHCl滴定至pH為3.0，然后用0.1mol/LNaOH滴定至pH為10.0，緩沖力(BC)按照pH每變化0.5個單位所消耗0.1mol/LNaOH的體積進行計算;另取濾液于－20℃冰箱保存，用于后續(xù)測定揮發(fā)性脂肪酸(VFA)、乳酸和氨態(tài)氮(NH3-N)含量。

VFA含量采用氣相色譜法測定;乳酸含量采用對羥基聯(lián)苯比色法測定;NH3-N含量采用苯酚－次氯酸鈉比色法測定。參照王國艮的方法計算發(fā)酵系數(shù)(fermentation coefficient，F(xiàn)C)和費氏評分(Fleig score，F(xiàn)S)，公式如下:

發(fā)酵系數(shù)=DM(%)+8×WSC(%DM)/BC;費氏評分=220+［2×DM(%)－15］－(40×pH)。

1.3.5 瘤胃降解率指標

選用3頭體況良好、體重(550±50)kg、安裝永久性瘤胃瘺管的荷斯坦奶牛，試驗飼糧組成(DM基礎(chǔ))為:玉米24.1%、麩皮12.3%、豆粕11.6%、苜蓿14.4%、羊草11.2%、全株玉米青貯24.4%、預(yù)混料2%;營養(yǎng)水平為:CP15.03%、NDF38.13%、ADF20.15%、NEL6.49MJ/kg，每天于06:00和18:00進行飼喂，全天自由飲水。

采用尼龍袋法測定青貯飼料24和48h的干物質(zhì)降解率(DMD)和中性洗滌纖維降解率(NDFD)。尼龍袋規(guī)格為12cm×6cm，孔徑為50μm，稱量3g左右青貯樣品裝入尼龍袋中，每個樣品每個時間點每頭牛設(shè)置4個重復(fù)，尼龍袋取出后，使用自來水沖洗干凈，在65℃烘箱中烘干48h，采用粉碎機粉碎至1mm，后續(xù)測定DM和NDF含量，計算降解率，公式如下:

DMD(%)=［(消化前樣品DM含量－消化后樣品DM含量)/消化前樣品DM含量］×100;

NDFD(%)=［(消化前樣品NDF含量－消化后樣品NDF含量)/消化前樣品NDF含量］×100。

1.3.6 營養(yǎng)價值綜合評價

采用模糊數(shù)學隸屬函數(shù)法對青貯營養(yǎng)價值進行綜合評價，如果測定的指標與青貯的營養(yǎng)價值呈正相關(guān)，計算公式如下:

R(Xi)=(Xi－Xmin)/(Xmax－Xmin)。

如果為負相關(guān)，則用反隸屬函數(shù)進行轉(zhuǎn)換，計算公式如下:

R(Xi)=1－(Xi－Xmin)/(Xmax－Xmin)。

式中:R(Xi)為指標測定值，Xmin和Xmax分別為某一指標所有測定值中的最小值和最大值。

對所有指標隸屬函數(shù)值進行相加，求其平均值，以平均值大小進行排名。

1.4 統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)使用Excel 2013進行匯總和整理，使用SAS 9.1軟件中GLM過程進行方差分析和Duncan氏法多重比較檢驗，結(jié)果以最小二乘均值表示，P＜0.05為差異顯著，0.05≤P＜0.10為存在趨勢。

3.2 不同青貯添加劑對全株玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響

青貯pH、乳酸含量和NH3-N/TN是衡量青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的重要指標。優(yōu)質(zhì)青貯飼料的pH應(yīng)在4.2以下，NH3-N/TN低于10%，乳酸含量在4%～6%。本試驗中，對照組青貯的各項指標均達到優(yōu)質(zhì)青貯飼料的要求，表明全株玉米青貯是一種較易獲得高品質(zhì)青貯飼料的原料，主要與其高WSC含量和附生乳酸菌數(shù)量較大有關(guān)。

盡管如此，本試驗添加不同青貯添加劑均可進一步提升青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)，不同程度地提升了乳酸含量，降低了pH和NH3-N/TN，其中，乳酸菌組提升乳酸含量的能力強于有機酸組，原因主要與二者調(diào)控青貯發(fā)酵的模式不同有關(guān)，乳酸菌作為青貯發(fā)酵促進劑，增加了乳酸菌的數(shù)量，進而促進WSC被乳酸菌利用而產(chǎn)生大量的乳酸，而有機酸作為青貯發(fā)酵抑制劑，直接酸化青貯飼料來抑制有害微生物的活動，保留飼料營養(yǎng)價值和改善發(fā)酵品質(zhì)的同時，會對乳酸菌的活動造成影響。李悅銘等在小麥青貯中添加不同濃度的甲丙混合酸，隨著甲丙混合酸濃度的增加，乳酸含量顯著線性降低。而薛春勝等在苜蓿青貯中添加甲酸顯著提升了青貯乳酸含量。

因此，應(yīng)用有機酸作為青貯添加劑，使用前應(yīng)需根據(jù)飼草的屬性篩選出適宜的添加量。NH3-N/TN是反映青貯過程中蛋白質(zhì)降解程度的指標，其含量直接影響飼料的適口性和營養(yǎng)價值，NH3-N/TN越高則表明蛋白氮降解越多，青貯發(fā)酵品質(zhì)越差。本試驗中，有機酸鹽組和有機酸組的NH3-N/TN較對照組顯著降低，與DaSilva等的結(jié)果一致，表明有機酸及其鹽對青貯飼料蛋白質(zhì)具有較強的保護能力。費氏評分作為評估青貯飼料質(zhì)量優(yōu)劣的標準之一，主要由青貯DM和pH計算得出，由于各組的DM含量無顯著差異，因此，本研究中費氏評分的變化規(guī)律與pH一致。

3.3 不同青貯添加劑對全株玉米青貯瘤胃降解率的影響

青貯飼料的DM和NDF瘤胃降解率是影響反芻動物干物質(zhì)采食量(DMI)的重要因素。目前，有關(guān)青貯添加劑對青貯飼料瘤胃DMD和NDFD影響的結(jié)果存在分歧，本試驗中，有機酸鹽組和纖維素酶組的DMD24h和NDFD24h較對照組顯著增加，且纖維素酶組最高，而乳酸菌組和有機酸組的DMD和NDFD與對照組無顯著差異。但劉帥等添加乳酸菌提高了全株玉米青貯DM和NDF的有效降解率。苗樹君等和萬江春等研究表明，添加乳酸菌分別提高了玉米秸稈和棉花秸稈的NDFD。

李悅銘等研究表明，添加甲丙混合酸增加了小麥青貯的DMD和NDFD。通過分析發(fā)現(xiàn)，青貯飼料DMD和NDFD與其NDF含量密切相關(guān)，以上研究中，青貯添加劑提升DMD和NDFD的同時，NDF含量均顯著降低。相比之下，纖維素酶對DMD和NDFD的影響研究結(jié)果較為一致。萬江春等研究發(fā)現(xiàn)，添加纖維素酶分別增加了玉米秸稈和草原天然牧草青貯的NDFD，與本試驗結(jié)果一致，主要原因是纖維素酶可水解植物細胞壁為單糖，改變其纖維素結(jié)構(gòu)并降低纖維含量。因此，添加纖維

4結(jié) 論