霉菌毒素吸附劑體外吸附效率的比較研究

2020-05-20 15:47:27 點(diǎn)擊：

霉菌毒素是霉菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物，普遍存在于飼料及其原料中。據(jù)報(bào)道，全世界至少25%的谷物不同程度地受到霉菌毒素的污染，對(duì)飼料業(yè)、畜牧業(yè)和人類健康造成嚴(yán)重危害[1]。目前已知污染飼料的霉菌毒素約有100多種，主要來(lái)自青霉菌屬、曲霉菌屬和鐮刀菌屬所，其中對(duì)動(dòng)物危害最嚴(yán)重的霉菌毒素有：黃曲霉毒素 (Aflatoxin, AF)、玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）、嘔吐毒素(Deoxynivalenol，DON)、煙曲霉毒素（Fumonisin，F(xiàn)UM）等。

控制飼料或食品中霉菌毒素的方法有很多，其中最常用的、最有效的方式是借助霉菌毒素吸附劑]吸附飼料中的霉菌毒素，并與之緊密結(jié)合，使霉菌毒素在通過(guò)動(dòng)物消化道時(shí)不被動(dòng)物所吸收，而直接排出體外，從而避免了霉菌毒素對(duì)動(dòng)物的危害。為了比較不同霉菌毒素吸附劑對(duì)霉菌毒素的吸附效果，本實(shí)驗(yàn)在模擬體內(nèi)胃腸道環(huán)境下，采用兩階段法系統(tǒng)評(píng)估了市場(chǎng)上常見的霉菌毒素吸附劑對(duì)黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的吸附情況，為更好的解決飼料中霉菌毒素的污染提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 霉菌毒素吸附劑

從國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上收集國(guó)內(nèi)及國(guó)外企業(yè)生產(chǎn)的9種霉菌毒素吸附劑，分別標(biāo)記為樣品A、B、C、D、E、F、G、H、I，Toxfin® S樣品由建明工業(yè)（珠海）有限公司提供。

1.2 霉菌毒素標(biāo)準(zhǔn)液的制備

1.2.1 0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液的配制（pH 3.0 和pH 6.8）

精密稱取35.814 g 十二水合磷酸氫二鈉至900 mL的蒸餾水中，然后用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0和6.8，定容后備用。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)霉菌毒素工作液（pH 3.0）

黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品，分別購(gòu)自新加坡Pribo 實(shí)驗(yàn)室。用pH 3.0磷酸鹽緩沖液配制霉菌毒素工作液。工作液中霉菌毒素的含量是根據(jù)飼料中霉菌毒素國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)及生產(chǎn)實(shí)際情況而設(shè)定。

THZ-82 型恒溫水浴振蕩器；Bio-Rad iMarkTM 酶標(biāo)儀；SK-1 快速混勻器； Kubota 2420 型高速離心機(jī)；黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素酶聯(lián)免疫定量試劑盒（荷蘭，EURO-PROXIMA公司）。

1.4方法

1.4.1 吸附實(shí)驗(yàn)

稱取50 mg霉菌毒素吸附劑樣品于試管中，加入10 mL pH3.0霉菌毒素工作液，體系中霉菌毒素吸附劑的添加量為5 mg/ml?？瞻讓?duì)照為不添加任何霉菌毒素吸附劑的10 mL pH3.0霉菌毒素工作液。將試管放在37℃恒溫振蕩器上，震蕩1 h。反應(yīng)結(jié)束后于3 500 r/m離心10 min，ELISA法測(cè)定上清液中的霉菌毒素含量。

1.4.2 解吸附實(shí)驗(yàn)

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，傾去離心管中上清液，在剩余物中加入10 mL pH6.8磷酸鹽緩沖液，37℃恒溫震蕩1 h。反應(yīng)結(jié)束后于3 500 r/m離心10 min，ELISA法測(cè)定上清液中剩余的霉菌毒素含量。

1.4.3 數(shù)理處理

根據(jù)檢測(cè)毒素的含量，按下列公式計(jì)算霉菌毒素吸附劑的吸附效率。

Y=100×（A-B-C）/A

上式中：Y 表示霉菌毒素吸附劑對(duì)霉菌毒素的吸附效率；A表示空白對(duì)照組（即霉菌毒素工作液中不加吸附劑）含量；B表示吸附試驗(yàn)中上清液中霉菌毒素的含量；C表示解吸附試驗(yàn)中上清液中霉菌毒素的含量。

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