1.1 試驗(yàn)材料

綠茶茶渣由松陽縣綠谷茶鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)科技有限公司提供?；罹鷶?shù)為1×107CFU/g的枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和黑曲霉由浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院飼料所提供。

以枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和黑曲霉為發(fā)酵菌株，按照本實(shí)驗(yàn)室的優(yōu)化工藝參數(shù)，即以70%豆粕、15%茶渣和15%麩皮為發(fā)酵底物，在溫度為30℃、含水量55%的條件下發(fā)酵72h，得到生物發(fā)酵飼料。發(fā)酵飼料的營養(yǎng)成分見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院畜牧所雙江實(shí)驗(yàn)基地進(jìn)行。試驗(yàn)期內(nèi)，試驗(yàn)雞只每天06:30、14:30各飼喂1次干拌料。有窗雞舍3層階梯式籠養(yǎng)，每窩位4只雞。自由采食與飲水，每日恒定光照16h，并觀察雞只健康情況，飼養(yǎng)管理和免疫均按照試驗(yàn)場原有程序進(jìn)行。

1.4 指標(biāo)測定及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

試驗(yàn)期間以重復(fù)為單位，記錄每天的喂料量、產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、破軟蛋數(shù)和死亡數(shù)，以周為單位，計(jì)算每重復(fù)產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比、破軟蛋率和死淘率。

1.4.2 蛋品質(zhì)

收集試驗(yàn)第28天和第56天的雞蛋，每重復(fù)5枚。用游標(biāo)卡尺測量雞蛋的縱徑長和橫徑長，并計(jì)算蛋形指數(shù)；用千分尺測量蛋殼厚度，測量雞蛋蛋殼3個(gè)不同位置，以其平均值作為該雞蛋蛋殼厚度；用羅氏比色扇測定蛋黃顏色，用SONOVA蛋品質(zhì)自動(dòng)分析儀測定雞蛋的哈氏單位。

1.4.3 血清抗氧化和生化指標(biāo)

試驗(yàn)第56天早上，每重復(fù)隨機(jī)選取2只雞，空腹翅靜脈采血，在4℃條件下3000r/min離心10min制備血清，-80℃保存。黃嘌呤氧化酶法測定血清超氧化物歧化酶（SOD），硫代巴比妥酸法測定血清丙二醛（MDA）含量，鉬酸鹽法測定過氧化氫酶（CAT），比色法測定谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）。血清中的葡萄糖、白蛋白、總蛋白、淀粉酶和脂肪酶含量均采用卓越300型全自動(dòng)生化分析儀測定。上述指標(biāo)測定所用試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA）和獨(dú)立 樣本t檢驗(yàn)，以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，多重比較用 Duncan´s 法，結(jié)果以平均值 ±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

3.1 生物發(fā)酵飼料對仙居雞產(chǎn)蛋性能的影響

影響蛋雞產(chǎn)蛋性能的因素很多，包括品種品系、個(gè)體差異、年齡、環(huán)境因素、生理階段、運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度、飼糧能量水平以及飼料添加劑等。茶渣中含有1%~2%的茶多酚，其所含有的兒茶素和黃酮類物質(zhì)對蛋雞的消化功能和雞蛋形成過程有積極影響，黃酮類物質(zhì)還可促進(jìn)母雞促黃體素雌激素和孕酮的分泌，從而使產(chǎn)蛋率升高。本試驗(yàn)中，向飼糧中添加4%發(fā)酵飼料代替豆粕可以使仙居雞的產(chǎn)蛋率提高4.92%，這與許多學(xué)者的研究結(jié)果一致。Xu等采用地衣芽孢桿菌發(fā)酵豆粕，日糧中添加2.5%發(fā)酵豆粕可以使蛋雞產(chǎn)蛋率提高3.59%。吳慧敏采用產(chǎn)朊假絲酵母、黑曲霉和枯草芽孢桿菌發(fā)酵綠茶茶渣，在蛋雞飼糧中添加2%發(fā)酵茶渣可以顯著提高蛋雞的產(chǎn)蛋性能。Yang等試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在蛋雞飼糧中添加4%和6%綠茶副產(chǎn)物可顯著提高產(chǎn)蛋率。

本試驗(yàn)中，各發(fā)酵飼料組間平均蛋重和死淘率差異均不顯著，這一結(jié)果與孫亞楠等和Azeke等的試驗(yàn)結(jié)果一致。而吳俊鋒等用發(fā)酵豆粕代替蛋雞飼糧中的豆粕，各組間死淘率差異不顯著，但處理組的平均蛋重高于對照組，這可能是因?yàn)榘l(fā)酵飼料及其添加量、蛋雞品種不同造成的差異。浙江仙居雞的平均蛋重一般在42g，但本試驗(yàn)的仙居雞的平均蛋重都低于42g，試驗(yàn)組較對照組有提高的趨勢。原因可能是本試驗(yàn)是在7月和8月進(jìn)行，天氣比較炎熱，導(dǎo)致仙居雞采食量下降，從而影響了蛋重，也可能是由于光照時(shí)間、溫度控制、通風(fēng)情況等環(huán)境因素導(dǎo)致的。另外，浙江省仙居雞一般采用放養(yǎng)，而本試驗(yàn)采用籠養(yǎng)，也可能導(dǎo)致仙居雞的平均蛋重低于42g。

劉媛媛用發(fā)酵豆粕代替肉雞飼糧中的豆粕，發(fā)現(xiàn)處理組肉雞整個(gè)生長階段的耗料增重比較對照組降低了7.58%。這與本試驗(yàn)結(jié)果顯著降低了蛋雞的料蛋比一致。這主要源于酵母菌和枯草芽孢桿菌菌體含有有益營養(yǎng)元素；其次，釀酒酵母、枯草芽孢桿菌和黑曲霉在代謝過程中會(huì)產(chǎn)生多種酶類和其他促生長因子；而且飼料中的有益微生物可以抑制病原菌、維持腸道微生物穩(wěn)態(tài)，進(jìn)而增強(qiáng)蛋雞抗病力，促進(jìn)生長。在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，添加發(fā)酵飼料可以降低仙居雞的破軟蛋率。

3.2 生物發(fā)酵飼料對仙居雞蛋品質(zhì)的影響

影響蛋雞蛋品質(zhì)的因素較多，除遺傳因素外，還受飼糧及蛋雞機(jī)體健康狀況的影響。本試驗(yàn)中，各組之間蛋形指數(shù)、蛋白比例、蛋黃比例和蛋殼比例并無差異，這是因?yàn)檫@4種指標(biāo)受遺傳因素影響較大。魏尊等研究也得到了相似的結(jié)果。蛋殼品質(zhì)的優(yōu)劣直接影響著蛋雞企業(yè)的利潤。鈣、磷、鈉、鉀、鋅和錳是影響蛋殼品質(zhì)的主要營養(yǎng)素，其中鋅和錳通過影響碳酸酐酶的活性和蛋殼粘多糖的合成而影響來影響蛋殼質(zhì)量。4%和6%發(fā)酵飼料組蛋殼厚度顯著高于對照組，這可能是由于發(fā)酵飼料中富含小肽等活性物質(zhì)，這些小肽可以促進(jìn)金屬離子的被動(dòng)吸收過程，從而增強(qiáng)了蛋殼厚度。也有一些研究與本試驗(yàn)結(jié)果不一致。張朝霞等和Kojima等發(fā)現(xiàn)在蛋雞飼糧中添加茶的副產(chǎn)品會(huì)導(dǎo)致蛋殼厚度顯著降低，Kaya等研究表明，隨著黑茶粉添加量的提高蛋殼厚度會(huì)逐漸下降。這可能是因?yàn)椴璺蹆?nèi)含有的單寧會(huì)阻礙鈣的吸收和利用。而在本試驗(yàn)中，茶渣經(jīng)過發(fā)酵后單寧含量可能比較低，這與朱飛等試驗(yàn)結(jié)果相似，黑曲霉固態(tài)發(fā)酵茶渣可顯著降低茶渣中的單寧含量。

蛋黃的色澤主要取決于飼糧中類胡蘿卜素和胡蘿卜素的含量。本試驗(yàn)中，3個(gè)處理組雞蛋蛋黃顏色均顯著提高，這可能是因?yàn)椴柙懈缓喾N色素的緣故。Abdo等也發(fā)現(xiàn)隨著綠茶添加量的提高，蛋黃顏色會(huì)隨之逐漸加深。

哈夫單位反映蛋白的狀況及雞蛋的新鮮程度，哈夫單位越高，代表蛋白越粘稠，雞蛋品質(zhì)越好。茶渣中含有的茶多酚具有極強(qiáng)的抗氧化能力，可以清除機(jī)體的自由基，降低對蛋白質(zhì)的損傷。本試驗(yàn)中，4%發(fā)酵飼料組雞蛋的蛋白高度提高，但是4%和6%發(fā)酵飼料組的哈夫單位均顯著高于對照組，這可能是因?yàn)殡u蛋重量不均勻所造成的。Biswas等和Xia等研究發(fā)現(xiàn)蛋雞飼糧中添加綠茶粉顯著提高了雞蛋的哈夫單位，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

3.3 生物發(fā)酵飼料對仙居雞血清抗氧化能力的影響

機(jī)體的健康程度與防御體系的抗氧化能力的強(qiáng)弱有著密切的聯(lián)系，正常機(jī)體的氧化損傷與抗氧化體系處于動(dòng)態(tài)平衡中，機(jī)體代謝產(chǎn)生的活性氧能不斷被機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)清除，以維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)。該防御體系包含多種具有抗氧化功能的酶類及非酶類物質(zhì)，如SOD、CAT、GSH-Px、維生素、氨基酸和金屬蛋白質(zhì)等。

動(dòng)物在代謝過程中產(chǎn)生的過氧化氫可以氧化機(jī)體的生物膜系統(tǒng)，從而對機(jī)體造成損傷。CAT的主要作用就是將過氧化氫分解為水和氧氣，從而減少其對動(dòng)物機(jī)體的傷害。綠茶含有的多酚類物質(zhì)具有潛在的抗氧化能力，豆粕含有的大豆異黃酮可以激活大鼠CAT的啟動(dòng)子，促進(jìn)CAT mRNA的表達(dá)，從而達(dá)到提高CAT活性，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力的目的。本試驗(yàn)中，添加發(fā)酵飼料的處理組CAT、SOD活性均顯著高于對照組，GSH-Px活性也有提高的趨勢，說明飼料中添加發(fā)酵飼料可以增強(qiáng)仙居雞抗氧化能力。周玲玲等研究表明，發(fā)酵豆粕可以顯著增強(qiáng)仔豬血清GSH-Px活性；吳俊峰等發(fā)現(xiàn)，蛋雞飼糧中添加發(fā)酵豆粕可以提高其血清SOD活性。

機(jī)體代謝產(chǎn)生的自由基攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸，引起脂質(zhì)過氧化，導(dǎo)致機(jī)體組織受損。MDA是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，通常通過MDA含量反映動(dòng)物機(jī)體的脂質(zhì)過氧化程度，間接體現(xiàn)機(jī)體細(xì)胞受損傷程度。添加4%和6%發(fā)酵飼料于仙居雞飼糧中可以降低其血清中MDA含量，提高機(jī)體的抗氧化能力。陳慶達(dá)等向蛋雞飼糧中添加發(fā)酵豆粕，也得到了相似的結(jié)論。

3.4 生物發(fā)酵飼料對仙居雞血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)是衡量動(dòng)物健康狀況和生理機(jī)能等的重要指標(biāo)。動(dòng)物機(jī)體活動(dòng)所需要的能量大部分來源于葡萄糖，正常情況下蛋雞血液中葡萄糖穩(wěn)定在一定水平以保證機(jī)體能量的供給。本試驗(yàn)中，添加生物發(fā)酵飼料的處理組血清葡萄糖水平與對照組并無顯著差異，表明發(fā)酵飼料對仙居雞血清葡萄糖含量影響不大，與黃靜等向胡須雞中添加發(fā)酵桑葉粉并未顯著改變其血清葡萄糖水平的結(jié)果一致。

血清中的總蛋白是血清中白蛋白和球蛋白的總和。血清中總蛋白和白蛋白含量可反映機(jī)體的營養(yǎng)狀況和蛋白質(zhì)的吸收與代謝狀況，其含量增加表明肝臟活動(dòng)增強(qiáng)，蛋白質(zhì)的合成代謝加強(qiáng)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料中添加6%發(fā)酵飼料可以顯著提高仙居雞血清白蛋白水平，表明飼料中添加發(fā)酵豆粕可以提高蛋白質(zhì)在仙居雞體內(nèi)的沉積率，與郭軍蕊等在海蘭褐殼蛋雞中添加1.0×108CFU/g枯草芽孢桿菌可以顯著提高其血清白蛋白水平的結(jié)果一致。

本研究中，隨著發(fā)酵飼料添加量的提高，仙居雞血清總蛋白含量增加，但與對照組差異不顯著，與柯祥軍等向肉雞日糧中添加發(fā)酵豆粕可提高血清總蛋白含量的試驗(yàn)結(jié)果相似。消化酶是對消化道中食物降解有促進(jìn)作用的特殊蛋白質(zhì)，主要包括蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶。動(dòng)物腸道中的消化酶活性反映其消化能力的強(qiáng)弱，決定了對飼料的利用效率。本試驗(yàn)中，發(fā)酵飼料組的淀粉酶和脂肪酶都有提高的趨勢，與林麗花等添加發(fā)酵豆粕可以提高肉雞的消化酶活性的結(jié)果一致。