1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用生物發(fā)酵飼料由武漢楚天艾科生物科技集團(tuán)有限公司提供。生物發(fā)酵飼料使用小麥、玉米、黃豆等作為原料，經(jīng)過(guò)植物乳桿菌和釀酒酵母等發(fā)酵活菌成分的分解代謝作用，采取相應(yīng)的加工工藝生產(chǎn)而成，其營(yíng)養(yǎng)水平（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）如下：粗蛋白質(zhì)27.96%、粗脂肪3.1%、粗灰分14.71%。對(duì)照組飼料為商用品牌的小龍蝦專(zhuān)用硬顆粒飼料，其營(yíng)養(yǎng)水平為：粗蛋白質(zhì)24.38%、粗脂肪11.33%、粗灰分7.46%。試驗(yàn)所用小龍蝦初始體質(zhì)量為（6.64±1.24）g，購(gòu)自當(dāng)?shù)匦↓埼r繁殖場(chǎng)，挑選規(guī)格一致、色澤清亮、無(wú)疾病癥狀的個(gè)體進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)條件與方法

養(yǎng)殖試驗(yàn)池塘位于湖北省江陵縣三湖農(nóng)場(chǎng)，選擇池塘10口，生態(tài)條件基本一致，單口池塘面積約0.8hm2，按照小龍蝦池塘養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)程進(jìn)行相應(yīng)的生態(tài)條件改造，投苗前種植沉水性植物，其中以輪葉黑藻為主，面積約占池塘底部的1/2。試驗(yàn)組與對(duì)照組各隨機(jī)選取5口池塘。試驗(yàn)小龍蝦幼苗投放密度為25kg/667m2，投放3d后，開(kāi)始投喂飼料，每天投喂2次（9：00，17：00），以下午為主，在養(yǎng)殖過(guò)程中根據(jù)小龍蝦的生長(zhǎng)和攝食情況做相應(yīng)的調(diào)整。定期檢測(cè)水體的水質(zhì)指標(biāo)，如氨氮、亞硝酸鹽、溶解氧、pH值及硫化氫等。試驗(yàn)期為60d。

1.3 樣品采集與分析測(cè)定

1.3.1 樣品采集養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組隨機(jī)進(jìn)行取樣，精確稱(chēng)量蝦的體質(zhì)量。稱(chēng)量完成后，每口池塘隨機(jī)選取20尾蝦，用1mL經(jīng)肝素鈉抗凝處理的醫(yī)用注射器抽取血淋巴，將血淋巴置于2mL無(wú)菌EP中，4℃靜置過(guò)夜后，于4℃，5000r/min離心15min，取上清液置于-80℃保存?zhèn)溆?。然后，迅速將蝦解剖，取出肝胰腺，放入無(wú)菌EP中液氮速凍后-80℃保存用于生化指標(biāo)的測(cè)定。最后，取出整個(gè)腹部肌肉，稱(chēng)重后置于-80℃保存。

1.3.2 生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定

WGR（%）=（mt-m0）/m0×100

SGR（%/d）=（lnmt-lnm0）/t×100

式中：mt為終末平均體質(zhì)量（g）、m0為初始平均體質(zhì)量（g）、t為飼養(yǎng)時(shí)間（d）。

1.3.3 肌肉品質(zhì)指標(biāo)測(cè)定

pH值的測(cè)定：分別于解剖后45min和24h檢測(cè)胸肌和腿肌的pH值，分別記為pH1和pH2。將pH計(jì)的探針插入肌肉中，測(cè)定3個(gè)不同位置，取平均值；含肉率（%）=（蝦腹部肌肉質(zhì)量/蝦體質(zhì)量）×100；滴水損失：將修整好的肉樣，稱(chēng)重記為Mdl1，裝入專(zhuān)用塑料袋中，在4℃冰箱放置24h后，用定性濾紙輕拭去肉樣表層汁液，稱(chēng)重記為Mdl2；滴水損失（%）=（Mdl1－Mdl2）/Mdl1×100；稱(chēng)取整個(gè)腹部肌肉樣品，記下其重量Mcl1，放入蒸煮袋中在85℃水浴鍋中蒸煮20min。蒸煮后冷卻至室溫，用吸水紙吸干水分，然后再次稱(chēng)重量Mcl2；蒸煮損失（%）=（Mcl1-Mcl2）/Mcl1×100。

1.3.4 血清非特異性免疫指標(biāo)測(cè)定

血清中總蛋白（TP）、溶菌酶（LZM）、堿性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）采用南京建成生物工程有限公司試劑盒檢測(cè)。

1.3.5 肝胰腺抗氧化指標(biāo)測(cè)定

稱(chēng)取0.1g解凍的樣品，加入0.9mL預(yù)冷的緩沖液，在冰浴條件下進(jìn)行勻漿，然后于4℃、3000r/min離心10min，取上清液即為粗酶液，立即進(jìn)行超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和丙二醛（MDA）指標(biāo)的測(cè)定。肝胰腺抗氧化指標(biāo)使用商業(yè)試劑盒（南京建成生物工程有限公司生產(chǎn)），按照說(shuō)明要求操作。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

所有結(jié)果均使用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，使用Excel和SPSS軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，發(fā)酵飼料組合對(duì)照組間數(shù)據(jù)差異使用單因素方差分析，采用Duncan's檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較，P<0.05表示差異顯著。

2結(jié)果與分析

生物發(fā)酵飼料是經(jīng)過(guò)益生菌發(fā)酵處理工藝后生產(chǎn)的含發(fā)酵豆粕和各種有益微生物等成分的新型飼料。經(jīng)過(guò)發(fā)酵后，飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子減少，飼料的部分大分子成分轉(zhuǎn)化成更易被動(dòng)物消化吸收的小肽、氨基酸等，增加了飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，從而促進(jìn)養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)。在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，生物發(fā)酵飼料組克氏原螯蝦的末體重、增重率和特定生長(zhǎng)率顯著增加（P<0.05）。試驗(yàn)結(jié)果表明，生物發(fā)酵飼料對(duì)克氏原螯蝦的生長(zhǎng)發(fā)育有明顯的促進(jìn)作用，這與鐘小群等研究鯉魚(yú)，Refstie等研究大西洋鮭的結(jié)果相似。

3.2 生物發(fā)酵飼料對(duì)克氏原螯蝦肌肉品質(zhì)的影響

肌肉品質(zhì)由多種指標(biāo)共同決定，包括pH值、滴水損失率和質(zhì)構(gòu)特性等。含肉率是評(píng)價(jià)魚(yú)蝦等水產(chǎn)品的品質(zhì)、經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能的重要指標(biāo)。蒸煮損失是衡量肌肉蛋白質(zhì)在加熱過(guò)程中變性凝固所失水分的重要指標(biāo)。朱坤等通過(guò)飼養(yǎng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵飼料顯著降低育肥豬肌肉蒸煮剪切力而提高嫩度。在本試驗(yàn)中，生物發(fā)酵飼料對(duì)克氏原螯蝦肌肉的含肉率和蒸煮損失有顯著性影響，而對(duì)pH值和滴水損失率無(wú)顯著影響。這說(shuō)明與投喂普通飼料相比，生物發(fā)酵飼料促進(jìn)了肌肉的生長(zhǎng)，增強(qiáng)了肌肉的保水性能，對(duì)肌肉品質(zhì)產(chǎn)生一定的影響。本研究結(jié)果與鐘小群等研究鯉魚(yú)、周興華等研究鯽魚(yú)等得出的發(fā)酵飼料對(duì)魚(yú)體品質(zhì)未產(chǎn)生顯著影響的結(jié)論不同，一方面可能是品種差異不同引起，另一方面可能是添加量不同所造成的。

3.3 生物發(fā)酵飼料對(duì)克氏原螯蝦免疫機(jī)能的影響

對(duì)于甲殼動(dòng)物而言，免疫系統(tǒng)不完善，免疫應(yīng)答較為原始，依靠非特異性免疫來(lái)抵抗病原微生物和其他有害物質(zhì)，因而可以將非特異性免疫相關(guān)的酶活性作為評(píng)價(jià)其免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)。

LZM是血液中殺菌的重要物質(zhì)，在防御病原入侵發(fā)揮重要作用。AKP是甲殼動(dòng)物生物體內(nèi)重要的代謝調(diào)節(jié)酶，在蝦蟹營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用中起著重要作用，可提高蝦蟹的抗病性。ACP是重要的多功能磷酸單酯水解酶，在維持動(dòng)物生理機(jī)能與免疫中發(fā)揮關(guān)鍵作用。氧自由基在先天免疫防御系統(tǒng)中起關(guān)鍵作用，然而過(guò)多的自由基可引起氧化應(yīng)激，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化，細(xì)胞和組織損傷，機(jī)體的免疫能力顯著下降。丙二醛（MDA）是脂質(zhì)過(guò)氧化的終產(chǎn)物，被普遍認(rèn)為是氧化損傷的指示指標(biāo)。同時(shí)，機(jī)體具有一套防御體系，會(huì)消除過(guò)量的氧自由基，其中SOD和CAT發(fā)揮主要的作用。

夏青等研究表明，以生物飼料作為凡納濱對(duì)蝦飼料時(shí)，蝦體抗氧化指標(biāo)明顯提高。黃世金等發(fā)現(xiàn)飼料中添加發(fā)酵豆粕后羅非魚(yú)的SOD、LZM和AKP活性顯著提高。

在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，生物發(fā)酵飼料組血清中的LZM、AKP、ACP活性和肝胰腺中的SOD和CAT活性均顯著上升（P＜0.05），而肝胰腺中的MDA活性顯著下降（P＜0.05）。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，生物發(fā)酵飼料提高了克氏原螯蝦非特異性免疫力和抗氧化能力，減少了細(xì)胞損傷。究其原因，可能是生物發(fā)酵飼料含有的氨基酸、消化酶、核苷酸和益生菌等成分，能夠增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫機(jī)能，促進(jìn)動(dòng)物健康生長(zhǎng)。

4結(jié) 論