1.1 試驗(yàn)儀器

DHG-9140A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科技有限公司)；KJELTEC-2200凱氏定氮儀[福斯華（北京）科貿(mào)有限公司]；BSA124S-CW型分析天平(德國(guó)賽多利斯公司)。

1.2  試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)采用3×4兩因素交叉分組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，日糧纖維含量和YC添加水平作為2個(gè)試驗(yàn)因素。纖維含量分別為40%、50%、60%，YC添加水平分別為0%、0.75%、1.5%、3%。試驗(yàn)共12個(gè)處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。

1.3  日糧組成

精飼料為40%濃縮料（由四川阿壩藏族羌族自治州茂縣茂欣農(nóng)牧場(chǎng)發(fā)展有限責(zé)任公司提供）和60%玉米，粗飼料為玉米秸稈，配制纖維含量分別為40%、50%、60%的三種類型的日糧，在其基礎(chǔ)上分別添加0%、0.75%、1.5%、3%的酵母培養(yǎng)物。試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

酵母培養(yǎng)物是用釀酒酵母作為菌種，經(jīng)過(guò)固體的發(fā)酵，濃縮、干燥得到的一類產(chǎn)品，本試驗(yàn)所用YC由美國(guó)國(guó)際生物營(yíng)養(yǎng)科技有限公司提供，其營(yíng)養(yǎng)成分如下:粗蛋白質(zhì)含量≥18.0%，粗脂肪含量≥1.5%，粗纖維含量≤12.0%，水分含量≤12.0%。

1.4  體外產(chǎn)氣試驗(yàn)方法

人工瘤胃裝置為：使用100ml的具塞注射器狀培養(yǎng)器，混合兩種瘤胃液（純瘤胃液：人工瘤胃液=1：2），放入水浴搖床設(shè)備。純瘤胃液的采集是將選取好的4頭牦牛于晨飼2h后同時(shí)屠宰，用四層紗布過(guò)濾瘤胃內(nèi)容物后，取足量瘤胃液儲(chǔ)存?zhèn)溆?。將保溫瓶預(yù)熱達(dá)到39℃并將純瘤胃液灌入，往保溫瓶中通入CO2，灌滿后立即蓋嚴(yán)瓶口，并迅速返回實(shí)驗(yàn)室，經(jīng)四層紗布過(guò)濾后持續(xù)通入CO2氣體5min備用。參考Menke等方法配置好人工瘤胃液，通入CO2氣體達(dá)到厭氧條件，混勻分裝到裝有3g底物的培養(yǎng)器中（每管50ml，包括兩支無(wú)發(fā)酵底物的空白管）,依次放入39℃的培養(yǎng)箱中。在發(fā)酵3、6、9、12、15、18、24、36、48h取出100ml培養(yǎng)器，迅速讀取活塞所處的刻度線數(shù)值并記錄。

2指標(biāo)測(cè)定

4.1 不同纖維和酵母培養(yǎng)物含量對(duì)產(chǎn)氣量及養(yǎng)分降解率的影響

體外產(chǎn)氣量反映瘤胃微生物的降解活性和飼料降解率，同時(shí)黃雅莉等報(bào)道日糧產(chǎn)氣量的大小與日糧有機(jī)物降解程度有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果與上述研究有一致規(guī)律，隨日糧纖維含量降低，產(chǎn)氣量顯著提高的同時(shí)，DM、ADF、NDF及CP降解率也顯著提高；纖維含量與YC添加量互作的情況下，也以纖維含量40%的YC添加組表現(xiàn)出更優(yōu)的產(chǎn)氣量與養(yǎng)分降解率。這是由于瘤胃體外發(fā)酵所產(chǎn)生的氣體是由瘤胃微生物降解日糧中養(yǎng)分而來(lái)，纖維含量為40%的日糧中，精料營(yíng)養(yǎng)成分含量更高，同時(shí)YC的添加對(duì)瘤胃微生物組成具有改善作用，提高瘤胃微生物對(duì)養(yǎng)分的消化吸收能力。

4.2 不同纖維和酵母培養(yǎng)物含量對(duì)pH值、MCP及NH3-N的影響

正常的瘤胃pH值對(duì)瘤胃發(fā)酵非常重要，一般來(lái)說(shuō)，正常的瘤胃pH值處于5.50~7.50之間,只有當(dāng)瘤胃pH值處于正常范圍，動(dòng)物機(jī)體的瘤胃發(fā)酵、飼料降解才能正常有序進(jìn)行。本試驗(yàn)結(jié)果中，隨著纖維含量和酵母培養(yǎng)物含量的改變，瘤胃液pH值并未發(fā)生較大差異的改變，發(fā)酵后pH值為6.72~6.90，均處于正常的范圍。陳亮等在研究植物乳桿菌對(duì)玉米秸稈和水稻秸稈體外發(fā)酵特性的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，其結(jié)果對(duì)瘤胃pH值的影響并不顯著，這與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致?？梢?jiàn)纖維含量的調(diào)整與YC的添加并不會(huì)對(duì)瘤胃微生物發(fā)酵環(huán)境產(chǎn)生不良影響，并能維持其穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境。

日糧在瘤胃中降解，產(chǎn)生的NH3-N主要用于微生物合成MCP，Murphy等的研究表明，微生物發(fā)酵的最佳NH3-N含量為6.3~27.5mg/dl。本試驗(yàn)中，NH3-N的濃度范圍處于15.79~25.13mg/dl，屬于正常的范圍。瘤胃中MCP的濃度高低可反映瘤胃微生物利用NH3-N的能力，同時(shí)也可以反映瘤胃微生物中的種群數(shù)量，MCP可為反芻動(dòng)物提供蛋白質(zhì)需要量的40%~80%，它是主要的氮源提供者。本試驗(yàn)中，瘤胃MCP濃度隨日糧酵母培養(yǎng)物的添加量的增多而顯著增加，可能由于酵母培養(yǎng)物促進(jìn)了瘤胃微生物對(duì)養(yǎng)分的降解作用，從而提高了瘤胃VFA，為微生物提供充足的能量和氮源，從而促進(jìn)了微生物蛋白的合成。董金金等研究表明，在日糧中添加酵母多糖，可顯著降低瘤胃中的NH3-N濃度，并且能提高M(jìn)CP的濃度，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致，但是Yoon等試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，酵母培養(yǎng)物可以刺激蛋白分解菌數(shù)量的增長(zhǎng)，它一方面導(dǎo)致了NH3-N生成增多，另一方面使得MCP合成加快。產(chǎn)生上述結(jié)果的原因可能是由于酵母培養(yǎng)物的種類的不同，同時(shí)本試驗(yàn)結(jié)合了日糧纖維含量與YC添加量的互作影響，因此，在較低的纖維含量下，瘤胃微生物對(duì)日糧降解后所產(chǎn)生的NH3-H含量較低，但酵母培養(yǎng)物中的酵母多糖具有提高M(jìn)CP的作用。

結(jié)論：本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，在體外試驗(yàn)條件下當(dāng)纖維含量為40%，酵母培養(yǎng)物含量為0.75%~1.5%時(shí)，能促進(jìn)瘤胃發(fā)酵和飼料降解，可為牦牛實(shí)際生產(chǎn)提供參考。