Q1

布病陽(yáng)性養(yǎng)殖場(chǎng)在抗體檢測(cè)結(jié)果全部轉(zhuǎn)陰后，多長(zhǎng)時(shí)間可從外面引進(jìn)牛羊？

牧場(chǎng)里引進(jìn)新的牛羊之后，不要立即混群。引進(jìn)之前先做一次布病檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為陰性后最好再隔離飼養(yǎng)7-15天，復(fù)檢結(jié)果為陰性后再混群飼養(yǎng)。

Q2

豬布魯氏菌病嚴(yán)重嗎？

豬的布病目前在我國(guó)不嚴(yán)重，根據(jù)農(nóng)科院牧醫(yī)所布病實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)和確診情況分析，可以說(shuō)我國(guó)目前還沒(méi)有確診到豬的布病。

Q3

布病血清檢測(cè)一般做滅活處理嗎？如何滅活？

一般ELISA檢測(cè)不做滅活處理，補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)推薦滅活。滅活操作：將待檢血清以56℃，30 min 的條件做滅活處理。

Q4

布魯氏菌競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒可以在動(dòng)物感染多久后查出可疑或全陽(yáng)性？

競(jìng)爭(zhēng)法為初篩方法，能更早的檢測(cè)出布病陽(yáng)性抗體。我們開發(fā)的cELISA應(yīng)該是一周之內(nèi)可以檢測(cè)到（但是需要調(diào)整Cut-off值）。間接ELISA應(yīng)該更晚。

Q5

試劑盒能區(qū)分野毒和疫苗抗體嗎？

實(shí)際上，抗體本身沒(méi)有區(qū)別，我們可以根據(jù)不同亞型抗體水平產(chǎn)生的高低，結(jié)合群體的免疫情況做出初步的判定。要對(duì)個(gè)體動(dòng)物進(jìn)行判定的話也不是完全不可以，比較復(fù)雜，要綜合運(yùn)用多種方法。比如需要將IgM和IgG分別單獨(dú)檢測(cè)，必要時(shí)得選用2個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)，將IgM曲線和IgG曲線繪制出來(lái)后用2種方法進(jìn)行檢測(cè)，由于野毒株和疫苗株它的抗體是有交集的，如果落在交集點(diǎn)上我們是沒(méi)法區(qū)分的，這個(gè)時(shí)候需要我們通過(guò)時(shí)間間隔實(shí)施區(qū)分。

Q6

強(qiáng)制免疫后的群體如何進(jìn)行鑒別檢測(cè)？

目前用到競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，蘭研生物的競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒就可以。當(dāng)然需要評(píng)估和對(duì)Cut-off值調(diào)整后使用。

Q7

目前羊場(chǎng)用布病活疫苗進(jìn)行免疫防疫，保護(hù)效果怎么樣？有無(wú)副作用？

S2和A19對(duì)羊的免疫效果都還是可以的，A19被認(rèn)為對(duì)山羊有一定的副作用。S2和A19都不可以注射免疫懷孕羊。

Q8

PCR檢測(cè)結(jié)果參考意義是什么？

PCR檢測(cè)主要用于對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的分析，不作為確診的標(biāo)準(zhǔn)，在一定的程度上可作為診斷的輔助方法。

Q9

一般感染布魯氏菌多久后可以進(jìn)行抗體檢測(cè)？

一周時(shí)間即可進(jìn)行抗體檢測(cè)。

Q10

未來(lái)有沒(méi)有試劑盒可以區(qū)分野毒和疫苗毒？

有。這個(gè)得根據(jù)疫苗來(lái)定，現(xiàn)在也可以做到，但非常繁瑣，只局限于像我們的專業(yè)性實(shí)驗(yàn)室，目前無(wú)推廣價(jià)值。我們期待新型疫苗能輕松改變這樣的現(xiàn)狀。

Q11

虎紅平板及試管凝集較cELISA方法有哪些優(yōu)勢(shì)與不足？在實(shí)際應(yīng)用中，是否應(yīng)綜合采用多種檢測(cè)方法對(duì)來(lái)提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性？

虎紅平板及試管凝集的優(yōu)勢(shì)是操作簡(jiǎn)單，不足是準(zhǔn)確率不高。實(shí)際上現(xiàn)在使用的cELISA方法也很簡(jiǎn)單，且準(zhǔn)確率很高。在實(shí)際應(yīng)用中我們需要綜合多種檢測(cè)方法檢測(cè)來(lái)提高準(zhǔn)確率。

Q12

在實(shí)驗(yàn)室或者臨床采樣過(guò)程中，怎么做好個(gè)人防護(hù)呢？

這很重要，當(dāng)我們確定布病陽(yáng)性牧場(chǎng)的時(shí)候，我們要?jiǎng)?wù)必做好呼吸道及眼鼻的防護(hù)。

Q13

牛羊布病一年免疫幾次較好？以后是否逐漸檢測(cè)凈化？

一年最多免疫一次，以后我們會(huì)逐漸檢測(cè)凈化。

Q14

基層獸醫(yī)如何開展檢測(cè)？網(wǎng)上購(gòu)買的檢測(cè)試劑可靠嗎？

基層獸醫(yī)也可以用ELISA的方法來(lái)進(jìn)行檢測(cè)，虎紅平板也可以。不管是網(wǎng)上還是線下采購(gòu)的試劑盒，最好都應(yīng)該做一下可靠性評(píng)估。

Q15

虎紅檢測(cè)結(jié)果大量呈陽(yáng)性，競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)結(jié)果全是陰性，這種結(jié)果如何確診？

有可能試劑盒存在很大的問(wèn)題。理論上競(jìng)爭(zhēng)ELISA應(yīng)該比虎紅檢測(cè)出更多的陽(yáng)性，因?yàn)榛⒓t雖然是初篩方法，但是更接近確診?；⒓t通過(guò)低PH值抑制了大部分IgM活性，本質(zhì)上更接近確診的方法。當(dāng)然也不能排除虎紅的質(zhì)量問(wèn)題，有些虎紅質(zhì)量不好，存在自凝現(xiàn)象，也有些虎紅，敏感性設(shè)的太高，導(dǎo)致大量非特異性，即假陽(yáng)性。

Q16

對(duì)于同一公司不同批次的試劑盒檢測(cè)同一份樣品結(jié)果的差異較大，應(yīng)如何處置？

主要原因還是產(chǎn)品批次不穩(wěn)定，質(zhì)控沒(méi)有設(shè)好。最好的處置方法就是不用這樣的試劑盒。

Q17

什么情況下適合采用熒光偏振方法來(lái)檢測(cè)布?。?/span>

熒光偏振實(shí)際上是一種確診方法，而不是初篩的方法。熒光偏振試劑中，標(biāo)記抗原雖然同時(shí)結(jié)合了血清中特異性IgM和IgG，但是由于IgM的對(duì)稱性結(jié)構(gòu)，實(shí)際獲取的僅僅是IgG引起的偏振數(shù)據(jù)。

Q18

一般布病免疫后幾個(gè)月開始檢測(cè)?

兩周到兩個(gè)月。cELISA方法應(yīng)該在兩周到六周的時(shí)間。前提是試劑盒需求提前評(píng)估，且Cut-off值需要做調(diào)整。

Q19

陽(yáng)性血清中有活菌嗎？

一般沒(méi)有。菌血癥情況下可能會(huì)有。

Q20

布病疫苗一年打幾次？

一年一次。

Q21

抗原檢測(cè)可靠嗎？

病原分離鑒定是抗原檢測(cè)的方法之一，是可靠的。如果是核酸檢測(cè)，就只能作為輔助診斷的方法。

Q22

抗體檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)復(fù)孔之間重復(fù)性差的原因有哪些？如何有效避免?

主要有兩點(diǎn)。一是試劑盒不穩(wěn)定；二是操作人員操作問(wèn)題，比如第一次和第二次加樣量差異。

Q23

注射疫苗后導(dǎo)致排菌的原因？

因疫苗免疫的刺激，導(dǎo)致已經(jīng)存在布病感染的動(dòng)物出現(xiàn)排菌增加的現(xiàn)象。

Q24

ELISA實(shí)驗(yàn)室污染嚴(yán)重怎么解決?

ELISA實(shí)驗(yàn)室一般不會(huì)出現(xiàn)污染嚴(yán)重的情況，但在實(shí)驗(yàn)操作中應(yīng)盡可能做到避免污染，污染將導(dǎo)致在下游數(shù)據(jù)分析中出現(xiàn)很多問(wèn)題，如孔與孔之間的高差異高背景值等，有幾種方法可以防止污染：首先確保在一個(gè)干凈的環(huán)境中進(jìn)行操作，檢測(cè)用水為去離子水或蒸餾水，加樣時(shí)不同樣品之間及時(shí)更換槍頭，前期處理樣本或加樣時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎，避免濺到或造成交叉污染；確保各試劑供應(yīng)經(jīng)常更新，每次加試劑時(shí)只取需要的量即可，避免將剩余試劑倒回原試劑瓶，因?yàn)檫@可能引入污染物。

Q25

免疫牛羊的產(chǎn)品是否會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害？

一般不會(huì)對(duì)人體造成危害。只有布魯氏菌才能感染人進(jìn)而造成危害，而免疫過(guò)布病疫苗的動(dòng)物血清和動(dòng)物產(chǎn)品中只含布魯氏菌抗體，并沒(méi)有布魯氏菌，因此免疫牛羊的產(chǎn)品對(duì)人體無(wú)害。

Q26

cELISA檢測(cè)出具的陽(yáng)性報(bào)告，是否可以作為捕殺的依據(jù)？

cELISA是初篩的方法，不能作為撲殺依據(jù)。試管凝集實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性時(shí)即可作為撲殺依據(jù)。