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在“禁抗”、“限抗”的大趨勢(shì)下，生物飼料異軍突起，成為當(dāng)前研究和開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)，也是未來(lái)飼料的主流發(fā)展方向。生物飼料主要包括發(fā)酵和酶解飼料、飼用酶制劑、微生態(tài)制劑、功能性蛋白肽等與生物技術(shù)相關(guān)的飼料和飼料添加劑產(chǎn)品。目前，關(guān)于生物飼料添加劑的報(bào)道多集中于產(chǎn)品生產(chǎn)試驗(yàn)中的效果評(píng)價(jià)上，有關(guān)產(chǎn)品本身安全性問(wèn)題的研究報(bào)道甚少。本次調(diào)查主要對(duì)飼用微生態(tài)制劑、酶制劑及標(biāo)示有微生物成分或酶制劑成分的混合型飼料添加劑等生物飼料添加劑產(chǎn)品進(jìn)行了常見(jiàn)致病菌、大腸菌群、霉菌總數(shù)、蠟樣芽孢桿菌等6項(xiàng)微生物指標(biāo)的檢測(cè)，旨在了解該類產(chǎn)品中病原微生物污染情況，以期為生產(chǎn)企業(yè)和養(yǎng)殖企業(yè)提供參考，為制訂相關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)提供數(shù)據(jù)支撐。

1 試驗(yàn)材料與設(shè)計(jì)

1.1 樣品

共采集樣品270批，均取自生產(chǎn)和使用環(huán)節(jié)。其中微生態(tài)制劑45批，酶制劑63批，標(biāo)示有微生物成分或酶制劑成分的混合型飼料添加劑樣品162批。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)與判定依據(jù)

涉及沙門氏菌、大腸菌群、霉菌總數(shù)、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌6項(xiàng)指標(biāo)。目前缺乏混合型飼料添加劑的微生物指標(biāo)限量規(guī)定及飼料中蠟樣芽孢桿菌的限量規(guī)定，本次檢測(cè)結(jié)果參考其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。具體見(jiàn)表1。

1.3 檢測(cè)方法

依據(jù)現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)。具體見(jiàn)表2。

2 結(jié)果

2.1 致病菌檢出情況

本次調(diào)查從5批飼料添加劑樣品中檢出沙門氏菌，總的檢出率為1.85%。其中，酶制劑和混合型飼料添加劑中沙門氏菌的檢出率分別為1.59%（1/63）和2.47%（4/162）；微生態(tài)制劑中未檢出沙門氏菌。

對(duì)45批微生態(tài)制劑進(jìn)行了金黃色葡萄球菌與志賀氏菌的檢測(cè)。其中，1批樣品中檢出金黃色葡萄球菌，檢出率為2.22%；未檢出志賀氏菌。另從微生態(tài)制劑樣品中分離出1株溶血葡萄球菌及2株肺炎克雷伯氏菌。

2.2 大腸菌群(見(jiàn)表3)

由表3 可知，大腸菌群總的超標(biāo)率為21.11%（57/270），檢出率為23.33%（63/270）。其中，微生態(tài)制劑超標(biāo)率為15.56%（7/45），檢出率為15.56%（7/45）；酶制劑超標(biāo)率為20.63%（13/63），檢出率為23.81%（15/63）；混合型飼料添加劑超標(biāo)率為22.84%（37/162），檢出率為25.31%（41/162），其中有1批樣品中大腸菌群達(dá)到4.1×105CFU/g。大腸菌群總數(shù)定量檢測(cè)值范圍在<10~105 CFU/g。

結(jié)果表明，不同種類生物飼料添加劑中大腸菌群污染水平相差不大?？傮w來(lái)看，生物飼料添加劑存在一定程度的大腸菌群污染情況。

2.3 霉菌總數(shù)(見(jiàn)表4)

由表4 可知，微生態(tài)制劑中霉菌總數(shù)超標(biāo)率為8.89%（4/45），檢出率為42.22%（19/45）；混合型飼料添加劑中霉菌總數(shù)超標(biāo)率為17.90%（29/162），檢出率為57.41%（93/162），其中有2批樣品中霉菌含量分別達(dá)到1.8×106CFU/g和3.1×106CFU/g。霉菌總數(shù)檢出數(shù)量級(jí)水平為<10~106CFU/g。

結(jié)果表明，霉菌在微生態(tài)制劑中和混合型飼料添加劑中存在率較高，尤其以混合型飼料添加劑霉菌污染情況較為嚴(yán)重。

2.4 蠟樣芽孢桿菌(見(jiàn)表5)

由表5可知，蠟樣芽孢桿菌總的超標(biāo)率為4.44%（10/225），檢出率為39.56%（89/225）。其中，酶制劑中蠟樣芽孢桿菌的超標(biāo)率為4.76%（3/63），檢出率為50.79%（32/63）；混合型飼料添加劑中蠟樣芽孢桿菌的超標(biāo)率為4.32%（7/162），檢出率為35.19%（57/162）。其中有1批酶制劑樣品中蠟樣芽孢桿菌含量達(dá)到3.1×107CFU/g。蠟樣芽孢桿菌檢出數(shù)量級(jí)水平為<10~107 CFU/g。

總的來(lái)看，酶制劑與混合型飼料添加劑受蠟樣芽孢桿菌污染率較高，尤其以酶制劑中蠟樣芽孢桿菌污染情況較為嚴(yán)重。

3 討論

3.1 生物飼料添加劑中存在多種致病菌

飼料添加劑中攜帶致病菌，動(dòng)物攝入后可直接影響畜禽健康。一方面使動(dòng)物患病或?qū)е聞?dòng)物食欲下降、生產(chǎn)性能降低等癥狀，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)經(jīng)濟(jì)損失；另一方面在患病動(dòng)物治療過(guò)程可能存在抗生素濫用或過(guò)量使用的現(xiàn)象，從而引起細(xì)菌耐藥，存在潛在的耐藥菌傳播風(fēng)險(xiǎn)。
本次調(diào)查檢出了金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、溶血性葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌，高延玲等從酶制劑中檢出了致瀉性大腸桿菌。從致病菌的檢出情況來(lái)看，生物飼料添加劑中存在多種致病菌污染的可能性。分析原因可能為：一是發(fā)酵菌種不純或發(fā)酵過(guò)程被雜菌污染所致，比如種子染菌、設(shè)備滲漏、發(fā)酵設(shè)備滅菌不徹底等；二是產(chǎn)品加工過(guò)程中所使用的載體帶菌或技術(shù)管理不善；三是產(chǎn)品儲(chǔ)存條件不當(dāng)，被環(huán)境中存在的病原微生物污染所致。

3.2 大腸菌群及霉菌污染情況有所改善但依然嚴(yán)峻

大腸菌群和霉菌在環(huán)境中廣泛存在，常以這兩類菌群的檢出情況來(lái)表示被檢樣品是否受到污染。大腸菌群數(shù)值越高反映該產(chǎn)品被腸道致病菌污染的可能性越大，動(dòng)物攝食之后有可能發(fā)生中毒和引發(fā)流行性疾病的傳播；飼料添加劑中霉菌的存在會(huì)直接導(dǎo)致飼料污染，一旦遇到適宜的條件（比如受潮、殘留等）霉菌就會(huì)大量繁殖，造成飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的降低和適口性的下降，同時(shí)產(chǎn)生毒素的幾率增大，動(dòng)物攝食之后可能會(huì)引起生產(chǎn)性能下降、胃腸道損傷、甚至死亡。霉菌總數(shù)雖然不代表樣品中霉菌毒素的含量，但是它客觀地反映了產(chǎn)品的衛(wèi)生狀況。

本次調(diào)查結(jié)果顯示，微生態(tài)制劑中大腸菌群檢出率為15.56%，酶制劑中大腸菌群檢出率為23.81%，混合型飼料添加劑中大腸菌群檢出率為25.31%，顯著低于高延玲等報(bào)道的大腸桿菌的檢出率（微生態(tài)制劑40%、酶制劑66.7%）；霉菌總數(shù)調(diào)查結(jié)果表明，微生態(tài)制劑中霉菌檢出率為42.22%，顯著低于高延玲等報(bào)道的80%的霉菌檢出率。產(chǎn)品合格率明顯提高，意味著近幾年生產(chǎn)企業(yè)的技術(shù)水平及安全防控意識(shí)逐步加強(qiáng)，同時(shí)也表明政府部門對(duì)飼料及飼料添加劑產(chǎn)品質(zhì)量安全的重視和監(jiān)督取得顯著成效。

需要注意的是，混合型飼料添加劑中霉菌檢出率為57.41%，相對(duì)較高?；旌闲惋暳咸砑觿┦墙鼛啄晷屡d的產(chǎn)品概念，包含的產(chǎn)品種類較多，各生產(chǎn)企業(yè)水平不一，目前暫無(wú)相應(yīng)產(chǎn)品的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致對(duì)其評(píng)價(jià)和監(jiān)管缺乏有效的依據(jù)，因此急需出臺(tái)相關(guān)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

3.3 生物飼料添加劑中蠟樣芽孢桿菌污染情況不容忽視

蠟樣芽孢桿菌廣泛存在于土壤、水、空氣及植物源、動(dòng)物源加工的產(chǎn)品中，食入后可引起人畜腸道疾病，出現(xiàn)腹瀉或嘔吐等食物中毒癥狀。在機(jī)體免疫力低下或有消耗性疾病時(shí)，可作為條件致病菌導(dǎo)致菌血癥、敗血癥、腦膜炎、肺炎等。陳玎玎等報(bào)道，杭州某動(dòng)物園飼養(yǎng)的兩只浣熊因感染蠟樣芽孢桿菌導(dǎo)致死亡。此外，飼料中含有蠟樣芽孢桿菌，將直接影響我國(guó)飼料產(chǎn)品的出口，如2015年6月25日，我國(guó)出口至意大利的1批發(fā)酵菌體蛋白飼料（豬用）中檢出含蠟樣芽孢桿菌以及大量細(xì)菌，被歐盟食品和飼料類快速預(yù)警系統(tǒng)（RASFF）通報(bào)。

本次調(diào)查結(jié)果顯示，酶制劑中蠟樣芽孢桿菌的檢出率為50.79% ，混合型飼料添加劑的檢出率為35.19%。高于楊媛等對(duì)原料乳中蠟樣芽孢桿菌的檢測(cè)結(jié)果，檢出率為33%（33/100）。低于劉琪等對(duì)發(fā)酵豆制品中蠟樣芽孢桿菌的調(diào)查結(jié)果，檢出率為84.6%（11/13）。生物飼料添加劑中蠟樣芽孢桿菌總的檢出率為39.56%，大部分飼料添加劑中未檢出蠟樣芽孢桿菌或數(shù)量較少，說(shuō)明蠟樣芽孢桿菌是可以有效控制的。

目前，我國(guó)飼料相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及食品標(biāo)準(zhǔn)GB 29921—2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量》中暫無(wú)對(duì)蠟樣芽孢桿菌的限量規(guī)定。國(guó)外的相關(guān)規(guī)定也不盡相同，食品方面大多數(shù)有相關(guān)規(guī)定的國(guó)家都將臨界值設(shè)置為103CFU/g，最大檢出限設(shè)定為104CFU/g。本次調(diào)查對(duì)該項(xiàng)指標(biāo)的判定按照《蠟樣芽孢桿菌食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》WS/T 82—1996中規(guī)定的閾值105CFU/g進(jìn)行判定，生物飼料添加劑中蠟樣芽孢桿菌總的超標(biāo)率為4.44%，其中酶制劑產(chǎn)品與混合型飼料添加劑產(chǎn)品超標(biāo)率接近，分別為4.76%和4.32%。普遍認(rèn)為，蠟樣芽孢桿菌含量越高，產(chǎn)毒素的可能性越大。楊媛等對(duì)從原料乳中分離的蠟樣芽孢桿菌做了進(jìn)一步檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)93.9%的菌株產(chǎn)生毒素或含有毒素基因。生物飼料添加劑中分離的蠟樣芽孢桿菌是否產(chǎn)毒素或含毒素基因有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

生物飼料作為當(dāng)前行業(yè)研究熱點(diǎn)及今后畜牧業(yè)健康發(fā)展的助力，其質(zhì)量安全至關(guān)重要。通過(guò)本次調(diào)查，我們發(fā)現(xiàn)生物飼料添加劑產(chǎn)品中存在一定程度的微生物污染風(fēng)險(xiǎn)及安全隱患，尤其以混合型飼料添加劑綜合污染情況相對(duì)較為嚴(yán)重。但目前缺乏混合型飼料添加劑的衛(wèi)生指標(biāo)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)過(guò)此次研究，初步了解了該類產(chǎn)品中微生物污染水平，以期為下一步制修訂相關(guān)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)奠定初步基礎(chǔ)。

對(duì)生物飼料添加劑中微生物污染情況的調(diào)查只是該類產(chǎn)品質(zhì)量安全評(píng)價(jià)的其中一個(gè)方面，其他影響因素還包括發(fā)酵菌種是否存在可轉(zhuǎn)移的抗生素耐藥基因或其他潛在毒素（性）、產(chǎn)品中是否添加抗生素、激素等違禁藥物、有效活菌數(shù)是否達(dá)標(biāo)等。相信隨著試驗(yàn)數(shù)據(jù)的不斷積累和對(duì)生物飼料質(zhì)量安全評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估機(jī)制的研究，對(duì)該類產(chǎn)品的評(píng)價(jià)體系必將不斷完善，生物飼料添加劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展前景也將更為廣闊。

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