1.2 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)魚飼養(yǎng)在1m3圓形鋼化玻璃缸中，除飼料等外界條件均相同。整個(gè)飼養(yǎng)期間保持水質(zhì)穩(wěn)定，水溫24～28℃，容 氧5.0mg/L以上，pH值6.8～7.5。整個(gè)試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間10周，每天9：00和16：00各投喂一次。

氨氮脅迫：將經(jīng)過飼喂10周的試驗(yàn)魚轉(zhuǎn)移到氨氮濃度100mg/L的1m3圓形鋼化玻璃缸中，每缸30尾魚，其他試驗(yàn)條件不變，以氯化銨為氨氮來源，進(jìn)行48h的脅迫試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)死亡率。

1.3 樣品采集 

每個(gè)試驗(yàn)組的 3 個(gè)重復(fù)缸中隨機(jī)選取 5 尾魚，取 3 份新鮮肝臟，每份2～5g，立即放入液氮罐中。從魚體的尾部靜（動(dòng)）脈取血，自然凝固后，4℃冰箱中放置2h，然后3000r/min冷凍離心10min，取上清液。所有樣品采集后，在-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

1.4 酶活性測定 

相關(guān)抗應(yīng)激免疫酶活性選用南京建成生物工程研究所的試 劑盒測定。分別測定超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（T-AOC）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 17.0和Origin 8.0軟件。運(yùn)用 SPSS 軟件進(jìn)行單因素方差分析，Origin軟件做柱狀圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 酒糟酵母培養(yǎng)物對草魚肝臟和血清中 SOD 活性影響

由圖1可知，在肝臟中，各酒糟酵母培養(yǎng)物組草魚SOD活性顯著低于對照組（P＜0.05），各酒糟酵母培養(yǎng)物組間差異不顯著（P＞0.05）血清中，各試驗(yàn)組草魚SOD活性沒有呈現(xiàn)明顯的規(guī)律性，其中，16%酒糟酵母培養(yǎng)物組草魚血清SOD活與8%、10%及12%的酒糟酵母培養(yǎng)物組間差異顯著（P＜0.05），對照組與8%和12%的替換組間差異顯著（P＜0.05）。

2.3 酒糟酵母培養(yǎng)物對草魚肝臟和血清中 AST 活性的影響

由圖3可知，在肝臟中，16%、8%、10%的酵母酒糟培養(yǎng)物組間差異顯著（P＜0.05）,10%替換組與12%和16%的替換組間差異顯著（P＜0.05）。其中10%酵母酒糟培養(yǎng)物組達(dá)到最大。在血清中，各個(gè)試驗(yàn)組的 AST 沒有出現(xiàn)顯著差異（P＞0.05）。AST活性的高低反應(yīng)草魚肝臟的健康程度，其升高的程度與肝細(xì)胞受損的程度相一致，因此，添加12%和16%的酵母酒糟培養(yǎng)物較為適宜。

2.4 酵母酒糟培養(yǎng)物對草魚肝臟和血清中 ALT 活性的影響

由圖4可知，在肝臟中，16%酒糟酵母培養(yǎng)物組草魚ALT活性與對照組、10%酒糟酵母培養(yǎng)物組差異顯著（P＜0.05）,其他試驗(yàn)組差異不顯著（P＞0.05）。ALT升高的程度與肝細(xì)胞受損的程度相一致，可用來指示魚體的健康程度。肝臟中12%和16%酒糟酵母培養(yǎng)物組ALT活性較低，說明替換量較為適宜。在血清中，各試驗(yàn)組沒有出現(xiàn)顯著性差異（P＞0.05）。12%酒糟酵母培養(yǎng)物組ALT活性最低。因此，本研究結(jié)果表明，在12%的替換量較合適。

2.5 高氨氮脅迫下酒糟酵母培養(yǎng)物對草魚的死亡率的影響

由表3可知，各組草魚在高氨氮12 h開始出現(xiàn)死亡；隨著脅迫時(shí)間的增加，各組試驗(yàn)魚的死亡率呈逐漸增長的趨勢。對照組的死亡率是最大，在48h達(dá)到70%；12%酒糟酵母培養(yǎng)物組死亡率最低僅為36.7%。說明在高氨氮的脅迫下，草魚機(jī)體自身的抵抗制止逐漸失去功能，酒糟酵母培養(yǎng)物能夠在一定程度上減緩死亡率。

3 討論

3.1 酒糟酵母培養(yǎng)物對草魚抗應(yīng)激性能的影響 

AST主要存在于肝細(xì)胞的線粒體和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。ALT主要存在肝細(xì)胞漿，肝組織受到破壞時(shí)，進(jìn)入血液內(nèi)，相應(yīng)的酶活性增強(qiáng)。ALT和AST升高的程度與肝細(xì)胞受損的程度相一致，可反映魚體的健康程度。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，酒糟酵母培養(yǎng)物試驗(yàn)組草魚血清中AST、ALT均沒有出現(xiàn)顯著性的差異（P＞0.05），其中12%組ALT活性最低。說明添加12%酒糟酵母培養(yǎng)物對草魚的機(jī)體抗應(yīng)激性能提高最明顯，可能由于該培養(yǎng)物中含有氨基酸、小肽、未知的功能的活性因子等起到改善機(jī)體的作用。

3.2 酒糟酵母培養(yǎng)物對草魚抗氧化功能的影響 

生物體不僅在正常的生理代謝過程中產(chǎn)生活性氧，自然環(huán)境的一些因子也會(huì)使活性氧增加，活性氧增加能破壞機(jī)體的組成成分，造成傷害。機(jī)體為了保持健康的狀態(tài)，需要體內(nèi)的SOD、T-AOC維持自由氧的含量。總抗氧化酶能對機(jī)體內(nèi)的自由氧等進(jìn)行降解。機(jī)體中的總抗氧化能力下降時(shí)，容易引發(fā)炎癥及免疫系統(tǒng)等疾病。本試驗(yàn)中，血清中T-AOC的活性無顯著性差異（P＞0.05），12%酒糟酵母培養(yǎng)物組草魚血清中活性最高；另外8%和12%酒糟酵母培養(yǎng)物組的草魚血清中SOD活性較高，并與對照組差異顯著（P＜0.05）。說明酒糟酵母培養(yǎng)物可提高草魚的抗氧化性，可能的原因是酒糟酵母培養(yǎng)物所含菌群種類豐富，能改善動(dòng)物腸道健康，增強(qiáng)動(dòng)物免疫力和抗病力。

3.3 酒糟酵母培養(yǎng)物對草魚抗高氨氮死亡率的影響 

養(yǎng)殖水體中的氨氮是判斷水質(zhì)的重要標(biāo)準(zhǔn)，是水體中最常見的毒性物質(zhì)。當(dāng)養(yǎng)殖水體中氨氮含量過高時(shí)，可以通過血液進(jìn)入水產(chǎn)動(dòng)物的腦部，致使氨中毒，出現(xiàn)昏迷，長時(shí)間暴露在高氨氮環(huán)境下甚至死亡。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在100mg/L的氨氮濃度下，各試驗(yàn)組草魚開始出現(xiàn)死亡。隨著時(shí)間的延長，各組草魚的死亡率出現(xiàn)明顯差異。陳智威等研究長蛸的氨氮急性脅迫試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在相同的氨氮濃度脅迫下，長蛸的死亡率隨著時(shí)間延長，逐漸升高；氨氮濃度逐漸增大，死亡率逐漸增加，與本試驗(yàn)結(jié)果類似。涂嬌等研究羅非魚飼喂 6 種藥物后對80mg/L氨氮濃度脅迫下的死亡率，發(fā)現(xiàn)不同的藥物幫助羅非魚抗氨氮脅迫的差異顯著。本試驗(yàn)中，對照組48h草魚的死亡率明顯高于各酒糟酵母培養(yǎng)物組，可能是酒糟酵母培養(yǎng)物中的未知功能因子發(fā) 揮了微生態(tài)制劑的功效，在一定程度上起到藥物的效果。酒糟酵母培養(yǎng)物可以替換一部分基礎(chǔ)飼料，一方面參與草魚生長的營養(yǎng)供給，另一方面還能起到抗外界因素脅迫的作用。

4 結(jié)論

酒糟酵母培養(yǎng)物可以增強(qiáng)草魚血清和肝臟中抗應(yīng)激相關(guān)酶的活性，并對高氨氮脅迫具有一定的抗性，且添加量12%較為適宜。

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