３.１　飼糧中添加ＹＣ對(duì)舍飼牦牛瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響　　

瘤胃ｐＨ是瘤胃生理狀況的最直接表現(xiàn)，與飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)成分密切相關(guān)，可綜合反映瘤胃微生物代謝和有機(jī)酸產(chǎn)生、吸收、排除及中和的狀況。Ｙｏｏｎ等研究表明，反芻動(dòng)物瘤胃ｐＨ為６.２～６.８時(shí)，瘤胃中發(fā)酵纖維物質(zhì)的微生物活性最高，ｐＨ為５.５～６.０時(shí)，瘤胃中發(fā)酵淀粉的微生物活性最強(qiáng)，當(dāng)瘤胃ｐＨ降低到５.５以下時(shí)，動(dòng)物容易出現(xiàn)酸中毒。本試驗(yàn)中，各組ｐＨ均處于正常生理范圍內(nèi)，隨著ＹＣ添加水平的升高呈線性降低的趨勢(shì)，與Ｅｒａｓｍｕｓ等在奶牛中的研究結(jié)果一致，可能是由于ＹＣ促進(jìn)了飼糧中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的快速降解，加速有機(jī)酸的積累，導(dǎo)致瘤胃ｐＨ下降?！　?/span>

ＮＨ３⁃Ｎ的含量可直接反映瘤胃中微生物生長(zhǎng)狀況，也是ＭＣＰ合成主要原料。研究表明最適宜瘤胃微生物生長(zhǎng)的ＮＨ３⁃Ｎ含量為１０～５０ｍｇ／ｄＬ。本試驗(yàn)中，隨著ＹＣ添加水平的升高，ＮＨ３⁃Ｎ含量逐漸降低，與Ｅｒａｓｍｕｓ等的結(jié)果一致，在奶牛飼糧中添加ＹＣ能降低瘤胃ＮＨ３⁃Ｎ含量。而Ｈｒｉｓｔｏｖ等在奶牛中的研究發(fā)現(xiàn)，ＹＣ對(duì)瘤胃含量無(wú)顯著影響，Ｌｉｕ等在綿羊的飼糧中添加ＹＣ能夠增加瘤胃ＮＨ３⁃Ｎ含量。不同的結(jié)果可能與動(dòng)物品種、飼糧組成、ＹＣ的來源、添加形式等有關(guān)。瘤胃內(nèi)ＮＨ３⁃Ｎ和ＭＣＰ的含量密切相關(guān)，ＭＣＰ的含量可以反映微生物攝取和利用ＮＨ３⁃Ｎ的能力。本試驗(yàn)中，隨著ＹＣ添加水平的升高，ＭＣＰ的含量線性升高，與Ｄｉａｓ等的研究結(jié)果一致，在泌乳奶牛飼糧中添加ＹＣ降低了瘤胃ＮＨ３⁃Ｎ含量，增加了ＭＣＰ的合成。Ｙｏｏｎ等研究表明，ＹＣ能提高瘤胃微生物的活性和生長(zhǎng)繁殖，刺激蛋白分解菌的生長(zhǎng)，加快ＮＨ３⁃Ｎ的生成和ＭＣＰ的合成。

ＶＦＡ是瘤胃內(nèi)碳水化合物發(fā)酵的主要產(chǎn)物，是反芻動(dòng)物主要的能量來源，包括乙酸、丙酸、丁酸及少數(shù)短鏈脂肪酸和支鏈脂肪酸。乙酸、丙酸和丁酸含量較高，其含量約占ＴＶＦＡ的９５％左右，其中丙酸的轉(zhuǎn)化效率最高，乙酸最低。丙酸在糖異生作用下合成葡萄糖，乙酸是乳脂合成的主要前體，在動(dòng)物生產(chǎn)中丙酸比例越高，可為機(jī)體提供的能量越高。研究表明，在反芻動(dòng)物飼糧中添加ＹＣ可增加ＶＦＡ的含量，也有研究表明，瘤胃中ＶＦＡ的含量與ＹＣ的添加水平無(wú)顯著關(guān)系。本試驗(yàn)中，隨著ＹＣ添加水平的升高，瘤胃內(nèi)乙酸比例和乙酸／丙酸顯著降低，丙酸比例顯著增加。與Ｈａｒｒｉｓｏｎ等在泌乳奶牛飼糧中添加ＹＣ增加瘤胃丙酸比例和降低乙酸比例的結(jié)果一致。這說明在舍飼牦牛飼糧中添加ＹＣ可以使牦牛瘤胃發(fā)酵類型由乙酸型向丙酸型轉(zhuǎn)變，在采食量相同的情況下，促進(jìn)舍飼牦牛的增重。

３.２　飼糧中添加ＹＣ對(duì)舍飼牦牛瘤胃微生物區(qū)系的影響　　

１６Ｓ ｒＲＮＡ高通量測(cè)序技術(shù)可以很好地揭示反芻動(dòng)物瘤胃微生物多樣性。本試驗(yàn)中，２０個(gè)樣品通過Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑ平臺(tái)測(cè)序后共獲得９１７７７０條優(yōu)化序列，平均長(zhǎng)度為４４０ｂｐ，共聚類得到１４６３個(gè)ＯＴＵ。略高于楊琦玥等在牦牛中的研究結(jié)果。Ｍａｏ等研究發(fā)現(xiàn)，覆蓋度高于９７％說明測(cè)序樣品取樣充分。本試驗(yàn)中各組覆蓋度均高于０.９９，說明本次測(cè)序結(jié)果能真實(shí)地反映舍飼牦牛瘤胃細(xì)菌群落種類和結(jié)構(gòu)多樣性。Ｓｈａｎｎｏｎ指數(shù)和Ｓｉｍｐｓｏｎ指數(shù)可反映瘤胃菌群的多樣性，Ｓｈａｎｎｏｎ指數(shù)越大，群落多樣性越高；Ｓｉｍｐｓｏｎ指數(shù)越小，群落多樣性越高。Ａｃｅ指數(shù)和Ｃｈａｏ指數(shù)可反映瘤胃菌群的豐富度，其數(shù)值越大，群落豐富度越高。本試驗(yàn)中，在舍飼牦牛中添加ＹＣ不會(huì)影響瘤胃細(xì)菌多樣性，但會(huì)增加瘤胃細(xì)菌的豐富度?！?/span>

研究表明，擬桿菌門和厚壁菌門是反芻動(dòng)物瘤胃中的優(yōu)勢(shì)菌門。牦牛瘤胃中的優(yōu)勢(shì)菌門為擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門和螺旋菌門，本試驗(yàn)中，舍飼牦牛瘤胃優(yōu)勢(shì)菌門為擬桿菌門、厚壁菌門和變形菌門，與前人研究基本一致。Ｅｖａｎｓ等研究發(fā)現(xiàn)，擬桿菌門在非纖維物質(zhì)的降解中發(fā)揮重要作用，而厚壁菌門主要參與纖維物質(zhì)的分解。非纖維物質(zhì)經(jīng)瘤胃發(fā)酵后產(chǎn)生丙酸，而纖維物質(zhì)被降解后主要產(chǎn)生乙酸。本試驗(yàn)中，隨著ＹＣ添加水平的升高，擬桿菌門相對(duì)豐度逐漸增加，厚壁菌門的相對(duì)豐度逐漸降低，但差異不顯著，同時(shí)，丙酸比例線性升高，乙酸比例線性降低。這可能與本試驗(yàn)在舍飼條件下進(jìn)行，牦牛采食了大量的精料，使得分解淀粉、可溶性碳水化合物的擬桿菌門的相對(duì)豐度升高有關(guān)。這說明ＹＣ可促進(jìn)擬桿菌門微生物的生長(zhǎng)、增殖，降解飼糧中非纖維類物質(zhì)產(chǎn)生更多的丙酸。螺旋菌門能夠降解纖維素、半纖維素、果膠等，對(duì)植物類纖維物質(zhì)轉(zhuǎn)化為ＶＦＡ產(chǎn)生重要影響。本試驗(yàn)中，螺旋菌門的相對(duì)豐度先升高后降低，呈二次曲線變化。這表明在牦牛飼糧中添加１％的ＹＣ可促進(jìn)瘤胃微生物對(duì)纖維類物質(zhì)的降解，同時(shí)與纖維降解密切相關(guān)的纖維桿菌門也呈現(xiàn)相似的變化趨勢(shì)，其在Ⅲ組（１％）纖維桿菌門相對(duì)豐度最高。這說明ＶＦＡ含量與組成的變化可能與不同微生物對(duì)纖維物質(zhì)和非纖維物質(zhì)降解程度有關(guān)。疣微菌門在哺乳動(dòng)物胃腸道免疫耐受中起主要作用，其物種豐度的減少或缺失與宿主免疫力的下降密切相關(guān)。本研究中，隨著ＹＣ添加水平的升高，疣微菌門的相對(duì)豐度線性升高。這表明在飼糧中添加ＹＣ可能與增強(qiáng)機(jī)體免疫力相關(guān)?！?/span>

張紅濤研究荷斯坦后備牛瘤胃微生物組成時(shí)發(fā)現(xiàn)，普雷沃氏菌屬和琥珀酸菌屬是瘤胃細(xì)菌區(qū)系的優(yōu)勢(shì)菌屬。高雨飛通過測(cè)序發(fā)現(xiàn)錦江牛瘤胃細(xì)菌多樣性發(fā)現(xiàn)在屬水平普雷沃氏菌屬、帕拉普氏菌屬、理研菌屬是優(yōu)勢(shì)菌屬。本試驗(yàn)中，舍飼牦牛瘤胃中優(yōu)勢(shì)菌屬為普雷沃氏菌屬１、擬桿菌目ＢＳ１１和理研菌科ＲＣ９，與前人研究結(jié)果不完全一致，推測(cè)可能由動(dòng)物品種、年齡、飼糧結(jié)構(gòu)、飼養(yǎng)管理等不同引起的。普雷沃氏菌屬是瘤胃中數(shù)量最多的一類擬桿菌門菌屬，參與多種微生物代謝、具有較高活性的半纖維素降解能力和適應(yīng)不同飼糧結(jié)構(gòu)的能力，在粗蛋白質(zhì)、淀粉、木聚糖和果膠的降解過程中發(fā)揮重要作用。本試驗(yàn)中，普雷沃氏菌屬１的相對(duì)豐度最高，與前人研究結(jié)果一致，且各組間差異不顯著。這可能是本研究飼糧粗蛋白質(zhì)和能量水平相近，沒有對(duì)普雷沃氏菌屬的相對(duì)豐度產(chǎn)生顯著影響。瘤胃球菌屬包括黃色瘤胃球菌和白色瘤胃球菌，是瘤胃中主要的纖維降解菌，能產(chǎn)生大量的纖維素酶、半纖維素酶和木聚糖酶，降解粗飼料中的纖維素和半纖維素。本研究中，瘤胃球菌屬２的相對(duì)豐度呈二次曲線變化，表明在舍飼牦牛飼糧中添加ＹＣ可以促進(jìn)瘤胃球菌的生長(zhǎng)、增殖，提高飼糧中纖維的降解率。瘤胃菌科是厚壁菌門中一種革蘭氏陰性菌，可降解纖維物質(zhì)產(chǎn)生乙酸。本試驗(yàn)中，瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃０１１、瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃００１和瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃０１４的相對(duì)豐度隨ＹＣ添加水平的升高而線性降低，使得乙酸比例呈線性降低，推測(cè)可能與ＹＣ促進(jìn)非纖維降解菌的生長(zhǎng)、增殖和飼養(yǎng)管理方式有關(guān)。同時(shí)，本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)瘤胃球菌科ＮＫ４Ａ２１４的相對(duì)豐度與乙酸比例呈顯著正相關(guān)，且瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃００１和瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃０１４的相對(duì)豐度與瘤胃液ｐＨ呈顯著正相關(guān)，ＮＨ３⁃Ｎ含量與瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃０１１的相對(duì)豐度呈顯著正相關(guān)。這說明疣微菌科不同屬的代謝能力不同，其中ＮＫ４Ａ２１４＿ｇｒｏｕｐ、ＵＣＧ⁃００１和ＵＣＧ⁃０１４菌屬可能參與ＶＦＡ代謝，而ＵＣＧ⁃０１１屬的相對(duì)豐度可能與ＮＨ３⁃Ｎ含量的產(chǎn)生密切相關(guān)。克里斯滕森菌科屬于厚壁菌門，在維持胃腸道結(jié)構(gòu)和功能和動(dòng)物機(jī)體免疫調(diào)節(jié)方面發(fā)揮重要作用。本試驗(yàn)中，克里斯滕森菌科Ｒ７的相對(duì)豐度隨著ＹＣ添加水平的升高而降低，且與瘤胃ｐＨ和ＮＨ３⁃Ｎ含量呈顯著正相關(guān)，表明克里斯滕森菌科與ＶＦＡ和ＮＨ３⁃Ｎ的代謝相關(guān)，說明ＹＣ通過改善瘤胃微生物相對(duì)豐度，維持腸道結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫力。

4結(jié)論