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蛋白飼料資源緊缺和價格的不斷飆升，已經(jīng)成為我國畜牧業(yè)發(fā)展的主要瓶頸之一。棉粕因為資源豐富，蛋白含量高且價格較豆粕、魚粉等蛋白原料低而備受青睞，但其中游離棉酚的存在使其利用受到限制。棉粕通過微生物發(fā)酵不但可以有效降解其中的游離棉酚含量，還可增加其營養(yǎng)價值，具有改善肉雞生長性能、屠宰性能、增強免疫力等作用。然而，發(fā)酵棉粕對于肉雞肌肉脂肪酸組成的影響未見報道。脂肪酸的含量是判斷肌肉品質(zhì)的重要指標之一。硬脂酸(C18：0)、軟脂酸(C16：0)、油酸(C18：1)、亞油酸(C18：2)是禽肉中主要的脂肪酸，其含量約占總脂肪酸的85％。95％。因此，本研究就酵母菌發(fā)酵棉粕對黃羽肉雞肌肉中這4種主要脂肪酸組成進行分析，為棉粕的深度利用和發(fā)酵棉粕生物飼料作為功能性蛋白飼料的開發(fā)提供依據(jù)。

1材料與方法

1．1試驗材料

發(fā)酵底物：棉粕、玉米、麩皮。

發(fā)酵菌種：熱帶假絲酵母ZD一3、釀酒酵母均由浙江大學飼料所選育提供。

培養(yǎng)基：酵母膏胨葡萄糖(瓊脂)培養(yǎng)基，酵母膏：蛋白胨：葡萄糖=1：2：2，葡萄糖溶液用無菌濾器過濾后單獨加入，固體培養(yǎng)基瓊脂添加量為2％。

1．2發(fā)酵棉粕的制備

發(fā)酵棉粕底物按照棉粕70％、玉米20％、麩皮10％混合均勻，底物與水為1：0.8，發(fā)酵棉粕制備參考文獻，未發(fā)酵底物加入等量的培養(yǎng)基，其余過程與發(fā)酵底物進行同樣的處理。

1．3試驗設(shè)計

將300只1 13齡黃羽肉雞飼喂商品飼料育雛14d后，再飼喂對照組日糧預飼7d，以適應(yīng)試驗粉狀飼料。然后從中選取180只健康的體重相近的肉雞，隨機分為3組，即對照組(CG組)、單酵母發(fā)酵棉粕組(CT組)，復合酵母發(fā)酵棉粕組(cr組)，每組6個重復，每個重復10只雞(公母各半)。其中CG組、CT組和CF組分別加入未發(fā)酵棉粕底物、熱帶假絲酵母發(fā)酵棉粕和熱帶假絲酵母與釀酒酵母復合發(fā)酵棉粕，添加量均為6％。試驗期42 d，分21～42日齡和43～64日齡兩個階段，飼養(yǎng)管理按常規(guī)進行，各組日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1．4樣品采集及預處理

在42和“日齡，每個重復隨機選取接近平均體重的2只雞，每組共12只，空腹12 h后，頸動脈放血致死。從每只雞的相同部位分離胸肌和腿肌約20 g，一80℃保存。分析前將樣品室溫解凍、剪碎，在真空冷凍干燥機中干燥24 h后迅速粉碎，用于肌肉脂肪酸分析。

1．5肌肉脂肪酸分析

取100 mg冷凍干燥樣品，加入l mL混合提取溶劑(甲醇：氯仿：水=8：4：3，體積比)，冰浴勻漿5 min、振蕩5 min、超聲10 min，然后在4℃以10 000 r／min離心5 min，取上清液。上清液中加入500μL氯仿和500 μL水，振蕩5 min，靜置分層后取下層分離液，用溫和氮氣吹干。加入0.5 mol／L的氫氧化鉀甲醇溶液500 μL，漩渦混合2 min，60 ℃水浴甲酯化20min，冰水冷卻。再加入正己烷500μL，加入飽和氯化鈉溶液500μL，振蕩萃取3min，4℃以10 000 r／min離心5 min后取上清液，用氣相色譜儀(6890N型，安捷倫公司)進行分析。

氣相色譜條件：FID檢測器，色譜柱DD—WAX石英毛細管柱(30rex0.25 minX0.25μm)。進樣口溫度250℃，進樣量lμL，分流比為10:1，載氣流量1．5 mL／min。采用程序升溫：50℃保持2 min，10 ℃／min到170 ℃，保持10 min；4 ℃／min到180℃，保持10 min；2℃／min到220℃，保持10 min。檢測器溫度300℃，氫氣流量40 mL／min，空氣流量400 mL／min，尾吹流量45 mL／min。

通過與標準樣品的保留時間來確定脂肪酸，結(jié)果用單個脂肪酸的峰面積占總甲酯化脂肪酸峰面積的百分比表示。

1．6數(shù)據(jù)處理與分析

飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸的含量由脂肪酸的組成計算所得。試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件One—way ANOVA進行分析，用LSD法進行多重比較。結(jié)果以(平均值±標準差)表示，顯著性水平為P<0.05。

2結(jié)果與分析

2．1發(fā)酵棉粕對2l一42日齡肉雞胸肌主要脂肪酸組成的影響

發(fā)酵棉粕對21～42日齡肉雞胸肌主要脂肪酸組成的影響見表2。由表2可知，較CG組而言，CF組顯著降低油酸的相對含量(P<0.05)，而各試驗組中亞油酸的含量顯著增jJI(P<0.05)。試驗組間及試驗組與對照組軟脂酸、硬脂酸、飽和脂肪酸及不飽和脂肪酸的含量、不飽和脂肪酸／飽和脂肪酸的比值均沒有顯著性的變化(P>0．05)。

2．2發(fā)酵棉粕對21～42日齡肉雞腿肌主要脂肪酸組成的影響

發(fā)酵棉粕對21。42日齡肉雞腿肌主要脂肪酸組成的影響見表3。由表3可知，與CG組相比，試驗組中軟脂酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、飽和脂肪酸、不飽和脂肪的含量及不飽和脂肪酸，飽和脂肪酸的比值均未發(fā)生顯著變化，而且試驗組間脂肪酸組成也沒有顯著性的改變(P>0.05)。

2．3發(fā)酵棉粕對43～64日齡肉雞胸肌主要脂肪酸組成的影響

發(fā)酵棉粕對43～64日齡肉雞胸肌主要脂肪酸組成的影響見表4。由表4可知，與CG組相比，CT組油酸含量和不飽和脂肪酸／飽和脂肪酸的比值顯著增加，硬脂酸和亞油酸含量顯著降低(P<0.05)，而軟脂酸、飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸的含量無變化(P>0.05)；CF組除軟脂酸含量顯著增加外，其余脂肪酸含量均未發(fā)生顯著變化(P>0.05)。試驗組間各脂肪酸及飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸及不飽和脂肪酸／飽和脂肪酸的比值差異顯著(P<0.05)。

2．4發(fā)酵棉粕對43～64日齡肉雞腿肌主要脂肪酸組成的影響

發(fā)酵棉粕對43～64日齡肉雞腿肌主要脂肪酸組成的影響見表5。由表5可知，與CG組相比，試驗組亞油酸含量顯著增加(JP<0.05)，軟脂酸、硬脂酸、飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸的含量及不飽和脂肪酸／飽和脂肪酸的值無顯著變化(P>0.05)；CT組油酸含量顯著降低(fk0.05)。與CT組相比，CF組軟脂酸含量顯著降低，而其余脂肪酸含量及飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸及不飽和脂肪酸／飽和脂肪酸的比值變化差異不顯著(D0.05)。

3 討論

肉雞日糧中發(fā)酵棉粕的添加對脂肪酸組成的影響可能是發(fā)酵過程中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物或者是酵母益生菌所引起，具體原因及對肌肉品質(zhì)更為詳盡的影響有待進一步研究。吳買生等陸1研究表明，在育肥豬日糧中添加復合益生菌調(diào)理劑可以增加肌肉中單不飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸含量，從而改善豬肉品質(zhì)。王娟娟等H1研究了日糧添加中發(fā)酵飼料對生長育肥豬脂肪品質(zhì)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵飼料可顯著提高豬背最長肌肌內(nèi)脂肪的含量，增加油酸和總單不飽和脂肪酸的含量，降低亞油酸和總多不飽和脂肪酸的含量，對硬脂酸和軟脂酸的含量沒有產(chǎn)生明顯的影響。本試驗在肉雞日糧中添加發(fā)酵棉粕，結(jié)果顯示可以顯著改變?nèi)怆u主要脂肪酸組成，而且對胸肌和腿肌的影響有所差異，這種改變對43。64日齡肉雞表現(xiàn)更為明顯，尤其是胸肌，這說明發(fā)酵棉粕對肉雞脂肪酸的影響具有時間效應(yīng)。此外，發(fā)酵棉粕所用菌種不同也表現(xiàn)出了明顯的差異。就43～64日齡胸肌而言，熱帶假絲酵母發(fā)酵棉粕顯著增加其不飽和脂肪酸／脂肪酸的比值，而復合發(fā)酵棉粕顯著增加其軟脂酸含量。發(fā)酵棉粕對肉雞脂肪酸組成的調(diào)節(jié)作用表明其具有改變?nèi)怆u肌肉風味的潛力。因為不飽和脂肪酸是影響其風味的主要物質(zhì)。

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