1.3 試驗(yàn)設(shè)計及試驗(yàn)動物 

試驗(yàn)選擇性別 ( 公牛 ) 相同、品種 ( 荷斯坦 ) 相同、體重 [(500±25)kg]相近的荷斯坦公牛 20頭，按體重隨機(jī)分為 2組， 對照組不添加復(fù)合微生物制劑，試驗(yàn)組每頭牛添加 80g/d 復(fù)合 微生物制劑試驗(yàn)預(yù)試期 7d，正試期 55d。單欄飼養(yǎng)。試驗(yàn)前對 場地進(jìn)行消毒，并對供試牛進(jìn)行驅(qū)蟲。飼養(yǎng)過程中飼喂全混合 日糧，每日早晚各飼喂 1 次，自由飲水。

1.4 樣品采集及處理 

于正試期的第15天開始，采用全收糞法連續(xù)收集 7d 新鮮糞便，用10%硫酸固氮，65℃烘干后粉碎并自封袋保存，用以測定養(yǎng)分表觀消化率。試驗(yàn)中期利用口腔插管法抽取瘤胃液，5層紗布過濾后 -80℃保存，用以測定酶活性。試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)日清晨空腹采集靜脈血，每頭牛采血10mL，3000r/min 離心10min，血清 -20℃冷凍保存，用以測定糖脂代謝指標(biāo)。

1.5 測定指標(biāo)

1.5.1 生長性能測定 

每次飼喂時準(zhǔn)確稱量飼糧的投喂量和剩余量，并于試驗(yàn)正式開始和結(jié)束時清晨空腹稱重，用以計算干物質(zhì)采食量、平均日增重以及料重比。

1.5.2 養(yǎng)分表觀消化率測定

飼糧和糞樣中的干物質(zhì)(DM)、粗蛋白質(zhì)(CP)、中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)含量的測定參照《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》的方法進(jìn)行。采用酸不溶灰分(AIA)作為內(nèi)源指示劑進(jìn)行養(yǎng)分表觀消化率的計算，計算公式如下：某養(yǎng)分表觀消化率 =1-bc/ad。式中：a為飼糧中該養(yǎng)分的含量；b為糞樣中該養(yǎng)分的含量；c為飼糧中AIA的含量；d為糞樣中AIA的含量。

1.5.3 瘤胃液中消化酶活性測定 

瘤胃液中木聚糖酶、果膠酶、濾紙酶活性采用3、5- 二硝基水楊酸比色法測定。取0.5%相應(yīng)底物溶液0.5mL，加入0.5m酶液，45℃水浴5min，迅速加入3、5- 二硝基水楊酸(DNS)溶液終止反應(yīng)，煮沸5min后取出加入蒸餾水10mL搖勻，在分光光度計上550mm處比色。瘤胃液中蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性采用試劑盒測定，試劑盒均購于上海勁馬試驗(yàn)設(shè)備有限公司，主要儀器為HWS-12型水浴鍋、721型分光光度計、恒溫箱和PL6906型酶標(biāo)儀。

1.5.4 血清糖脂代謝指標(biāo)測定 

血清中尿素氮、葡萄糖、膽固醇、甘油三酯含量按照試劑盒說明書進(jìn)行測定，主要儀器為恒溫箱和PL-6906型酶標(biāo)儀。

1.6 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用Excel 2010進(jìn)行初步整理，再用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析，并用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)合微生物制劑對育肥牛生長性能的影響 

由表2可知，與對照組相比，試驗(yàn)組干物質(zhì)采食量與平均日增重分別提高2.74%和28.95% (P＜0.05)，試驗(yàn)組料重比降低23.27% (P=0.06)。

2.2 復(fù)合微生物制劑對育肥牛營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響 

由表3可知，與對照組相比，試驗(yàn)組干物質(zhì)表觀消化率無顯著差異 (P＞0.05)，但是試驗(yàn)組粗蛋白質(zhì)表觀消化率提高1.56% (P＜0.05)，中性洗滌纖維表觀消化率提高1.93% (P＜0.05)。

2.3 復(fù)合微生物制劑對育肥牛瘤胃消化酶活性的影響

由表4可知，與對照組相比，試驗(yàn)組瘤胃液中蛋白酶和淀粉酶活性分別提高8.87% (P＜0.01)和0.27% (P＜0.05)，試驗(yàn)組瘤胃液中果膠酶活性提高18.63%(P＜0.01)，但是試驗(yàn)組瘤胃液中脂肪酶、木聚糖酶和濾紙酶活性差異不顯著 (P＞0.05)。

2.4 復(fù)合微生物制劑對育肥牛血清糖脂代謝指標(biāo)的影響 

由表5可知，與對照組相比，試驗(yàn)組血清中葡萄糖含量提高11.67% (P＜0.01)，膽固醇和甘油三酯含量分別提高22.91%和12.84% (P＜0.01)。

3 討論

3.1 復(fù)合微生物制劑對育肥牛生長性能的影響

作為營養(yǎng)物質(zhì)吸收的直接表現(xiàn)，增重效果一直以來都是人們關(guān)注的重點(diǎn)。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組平均日增重比對照組提高28.95%，說明所添加的復(fù)合微生物制劑對荷斯坦公牛的增重效果有顯著的促進(jìn)作用。而采食量的提升是提高增重效果的基礎(chǔ)，在本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組干物質(zhì)采食量比對照組提高2.74%。采食量和日增重的提升可能是由于所添加的復(fù)合微生物制劑對瘤胃的發(fā)酵起到了一定的調(diào)控作用。相關(guān)研究表明，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌能夠產(chǎn)生豐富的蛋白酶、淀粉酶、細(xì)胞壁裂解酶和半纖維素酶等，通過改善消化道內(nèi)生理過程來促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，從而提高動物的生長性能。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組料重比也有明顯的降低，這說明復(fù)合微生物制劑不只是通過采食量的增加促使日增重的提升，而且對飼糧的消化吸收也具有調(diào)控作用。飼料轉(zhuǎn)化率的提高可能來源于2方面因素：一是復(fù)合微生物制劑提高了瘤胃對營養(yǎng)物質(zhì)的消化能力；二是其促進(jìn)了機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)以及儲備能力，其具體的作用機(jī)理還有待進(jìn)一步探究。

3.2 復(fù)合微生物制劑對育肥牛養(yǎng)分表觀消化率的影響 

養(yǎng)分消化率的改善是提高動物生長性能的基礎(chǔ)。反芻動物進(jìn)食后，飼糧首先在瘤胃內(nèi)進(jìn)行微生物發(fā)酵，然后再進(jìn)入其他胃室進(jìn)行消化。其養(yǎng)分的消化主要依賴于瘤胃微生物的降解。本試驗(yàn)中，干物質(zhì)表觀消化率提升的并不顯著，但是粗蛋白質(zhì)和中性洗滌纖維表觀消化率分別提升1.56%和1.93%，其原因可能是由于試驗(yàn)所用復(fù)合微生物制劑對瘤胃有益菌的快速繁殖起到積極的調(diào)節(jié)作用。因?yàn)榻湍改軌蛱岣吡鑫竷?nèi)白色瘤胃球菌和黃色瘤胃球菌的數(shù)量，從而提高纖維降解酶的活性，而枯草芽孢桿菌能夠提高瘤胃蛋白分解菌和淀粉分解菌的數(shù)量，促進(jìn)蛋白質(zhì)和淀粉的降解。碳源和氮源的降解速度同時提高，可以為瘤胃內(nèi)的有益菌群繁殖提供充足且均衡的物質(zhì)基礎(chǔ)。

3.3 復(fù)合微生物制劑對育肥牛瘤胃消化酶活性的影響 

蛋白酶是瘤胃內(nèi)促進(jìn)蛋白質(zhì)降解的一類活性物質(zhì)的總稱。瘤胃內(nèi)豐富的蛋白酶系統(tǒng)及較高的酶活性是蛋白質(zhì)消化吸收的首要條件。因?yàn)槟軌蜻M(jìn)入小腸被消化吸收的蛋白質(zhì)1/2以上來自微生物蛋白，而飼糧中的植物蛋白質(zhì)要在瘤胃內(nèi)完成降解和微生物合成2個過程才能轉(zhuǎn)化為微生物蛋白。在本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組瘤胃液中蛋白酶活性比對照組提高8.87%，說明本試驗(yàn)所采用的復(fù)合微生物制劑對提高瘤胃蛋白酶活性有顯著功效。因?yàn)槠渲邪奈⑸锊粌H在自身繁殖的過程中能夠產(chǎn)生蛋白酶，而且能夠促進(jìn)瘤胃固有的蛋白降解菌產(chǎn)生蛋白酶。本試驗(yàn)中，復(fù)合微生物制劑對瘤胃液中脂肪酶活性沒有顯著影響，但是提高了瘤胃液中淀粉酶活性，其原因可能是由于復(fù)合微生物制劑促進(jìn)瘤胃微生物繁殖的過程中，瘤胃微生物菌群需要快速獲得更多的能源物質(zhì)而形成反饋調(diào)節(jié)，促使淀粉快速降解提供能源和前體物。復(fù)合微生物制劑還提高了瘤胃液中果膠酶的活性，這可能是中性洗滌纖維消化率得到改善的直接原因。因?yàn)楣z是初生細(xì)胞壁和次生細(xì)胞壁間纖維素、半纖維素的黏接物，果膠酶活性提高能夠促使果膠的降解，為纖維降解提供有利條件。但是本試驗(yàn)中木聚糖酶和濾紙酶活性并未發(fā)生明顯改變，其原因可能是微生物的效能還不足以使粗纖維的降解發(fā)生明顯變化，或是微生物的快速繁殖使飼糧降解速度加快，在瘤胃內(nèi)停留時間變短，酶的作用時間不足所致。

3.4 復(fù)合微生物制劑對育肥牛血清糖脂代謝指標(biāo)的影響

血液中膽固醇和甘油三酯的含量是衡量脂類代謝的重要指標(biāo)，血液中的葡萄糖除了直接為機(jī)體供能以外，還會以糖原或脂類的形式保存于機(jī)體當(dāng)中。本試驗(yàn)血清中膽固醇及甘油三酯含量顯著升高的原因是由于進(jìn)入血液的葡萄糖含量升高還是添加劑促進(jìn)了脂類的直接攝入還有待深入研究。反芻動物瘤胃中的乳酸含量提升后會迅速轉(zhuǎn)化為丙酸，隨后被動物吸收，再進(jìn)入肝臟異生為葡萄糖供機(jī)體使用。本試驗(yàn)瘤胃中淀粉酶活性增高，為乳酸菌發(fā)酵提供了充足的糖類物質(zhì)基礎(chǔ)，同時，添加劑中的酵母又能夠促進(jìn)乳酸菌的快速繁殖，可使大量的乳酸轉(zhuǎn)變?yōu)楸岫晃?，再由肝臟異生為糖，這可能是本試驗(yàn)中血清葡萄糖含量顯著升高的原因。

4 結(jié)論 

本試驗(yàn)中的復(fù)合微生物制劑對荷斯坦公牛的干物質(zhì)采食量和增重效果都有促進(jìn)作用，能夠在一定程度上改善料重比，并且復(fù)合微生態(tài)制劑能夠提高部分瘤胃消化酶活性，改善營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。

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  【性狀】
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  本品所用菌株具有穩(wěn)定性，抗逆性，具有耐熱、耐酸、耐膽汁，通過消化道不失活，無污染、無任何違禁物質(zhì)、綠色環(huán)保的特點(diǎn)，可長期添加。
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