1.4 試驗方法

1.4.1 發(fā)酵種子液的制備

從植物乳桿菌UR-3斜面挑取一環(huán)，接種到制備好的MRS液體培養(yǎng)基中，靜置 37℃培養(yǎng)24h后，吸取5%的菌種，轉(zhuǎn)到MRS液體培養(yǎng)基中，37℃靜置培養(yǎng)24h，最終制成發(fā)酵種子液。

1.4.2 發(fā)酵飼料的制作

將300g液體飼料（水料比2.5：1）裝入密封的塑料桶中，充分混合均勻后繼續(xù)接菌，放于振蕩培養(yǎng)箱中，按試驗條件進行發(fā)酵培養(yǎng)，經(jīng)此處理所得的發(fā)酵飼料為乳酸菌FLF；同樣條件下，不接種植物乳桿菌處理的發(fā)酵飼料為對照組。

1.4.3 植物乳桿菌FLF發(fā)酵條件優(yōu)化試驗

1.4.3.1 單因素試驗

選擇接種量、溫度、發(fā)酵時間3個優(yōu)化條件進行單因素試驗的考查。

設(shè)定發(fā)酵時間72h，溫度34℃，研究1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、3.5%不同的接種量對液體飼料發(fā)酵效果的影響。設(shè)定發(fā)酵溫度34℃，接種量2.0%，研究24、48、72、96h不同的發(fā)酵時間對液體飼料發(fā)酵效果的影響。設(shè)定發(fā)酵時間72h，接種量2.0%，研究25、28、30、34、37℃不同的發(fā)酵溫度對液體飼料發(fā)酵效果的影響。

1.4.3.2 正交試驗

在單因素試驗的基礎(chǔ)上進行正交試驗，采用正交試驗L9（33），確定植物乳酸菌FL的最佳發(fā)酵組合條件。植物乳桿菌FLF正交試驗因素水平設(shè)計見表2。

1.4.4 測定方法

1.4.4.1 乳酸測定

乳酸測定的操作方法按照說明書進行。

1.4.4.2 生物量的測定

在超凈臺內(nèi)取菌體斜面，在斜面內(nèi)加5mL無菌水,用接種環(huán)刮下表面培養(yǎng)物制成菌懸液。用10倍梯度稀釋法將菌懸液稀釋成濃度分別為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8不同濃度梯度后，充分振蕩，制成稀釋液。選擇3個合適的稀釋倍數(shù)，分別吸取3個稀釋度中菌懸液各0.2mL，涂布于完全凝固的平板計數(shù)培養(yǎng)基中，每個梯度稀釋做3個平行，倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2d后計數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用DPS軟件對試驗數(shù)據(jù)進行方差分析。

2.結(jié)果與分析

2.1 植物乳桿菌發(fā)酵對液體飼料營養(yǎng)水平的影響

2.1.1 接種量對植物乳桿菌FLF營養(yǎng)水平的影響

發(fā)酵時間72h，溫度34℃，研究接種量1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、3.5%對FLF營養(yǎng)價值的影響（見表3）。

由表3可知，植物乳桿菌接種量的不同，F(xiàn)LF的粗蛋白水平也不同；當(dāng)接種量為 2.0%，粗蛋白含量達最大（6.60%），原因可能是植物乳桿菌液體發(fā)酵將飼料中的蛋白質(zhì)分解成為許多小分子物質(zhì)，此時乳酸含量和生物量顯著性提高（P<0.05），并達到最大值，分別為187.16mmol/L、17.94×109cfu/mL；但當(dāng)接種量大于2%時，F(xiàn)LF中粗蛋白含量有所下降，可能是FLF中的菌種達到飽和，相互之間競爭底物，從而不利菌種的存活，導(dǎo)致植物乳桿菌的生物量降低。所以，當(dāng)發(fā)酵時間72h、溫度34℃、接種量2%時液體飼料發(fā)酵效果最佳。

2.1.2 發(fā)酵時間對植物乳桿菌FLF營養(yǎng)水平的影響

發(fā)酵溫度為34℃，接種量2%，研究發(fā)酵時間24h、48h、72h、96h對FLF營養(yǎng)水平的影響（見表 4）。

由表4可知，植物乳桿菌 FLF 可以使飼料中粗蛋白、乳酸含量和生物量相對提高。不同發(fā)酵時間（24、48、72、96h）條件下，飼料粗蛋白含量分別為6.41%、6.69%、6.58%、6.39%。當(dāng)發(fā)酵48h時，粗蛋白含量達到最大值6.69%。在植物乳桿菌發(fā)酵初期會產(chǎn)生大量的乳酸，在24、48、72h3個時間點，F(xiàn)LF中乳酸含量分別 達到151.80、186.49、187.16mmol/L，48、72h與24h之間差異顯著（P<0.05）。研究發(fā)現(xiàn)，在發(fā)酵初期階段，由于有足夠多的營養(yǎng)物質(zhì)進行發(fā)酵，植物乳桿菌的繁殖速度較快；但是在發(fā)酵后期72~96h，由于飼料中營養(yǎng)物質(zhì)被逐漸損耗掉，無法滿足菌種正常生長的基本需要，生物量也隨之逐漸減少；同時，植物乳桿菌代謝產(chǎn)生乳酸受到抑制，產(chǎn)生的乳酸也逐漸減少。所以，為了更好地應(yīng)用于液體飼料發(fā)酵的生產(chǎn)實踐中，選擇以最高的粗蛋白含量為標(biāo)準(zhǔn)，所以發(fā)酵溫度為34℃，接種量2.0%的情況下，植物乳桿菌 FLF 的最佳發(fā)酵時間為48h。

2.1.3 發(fā)酵溫度對植物乳桿菌FLF營養(yǎng)水平的影響

發(fā)酵時間72h，接種量2%，研究發(fā)酵溫度25、28、30、34、37℃對FLF營養(yǎng)水平的影響（見表5）。

由表5可知，隨著FLF發(fā)酵溫度的升高，粗蛋白含量也逐漸升高，當(dāng)發(fā)酵溫度達 37℃時，粗蛋白達到最高（6.81%）。發(fā)酵溫度在25~37℃時，乳酸含量及生物量等指標(biāo)均顯著性提高（P<0.05），溫度和各項指標(biāo)呈正相關(guān)關(guān)系。

由表6、表7可知，植物乳桿菌液體發(fā)酵液中乳酸量和粗蛋白含量的極差（R）最大值，可以得出影響植物乳桿菌液體發(fā)酵因素的主次順序為：發(fā)酵時間>接種量> 發(fā)酵溫度，所以最佳發(fā)酵組合條件，即發(fā)酵時間為48h、接種量2.5%、溫度37 ℃。

2.2 正交試驗結(jié)果（見表6、表7）

2.3 植物乳桿菌 FLF 試驗前后飼料中各指標(biāo)的比較（見表8）

由表8可知，液體飼料接種植物乳桿菌UR-3后，經(jīng)過48h的發(fā)酵，粗蛋白、生物量和乳酸含量都顯著高于尚未發(fā)酵的FLF（P<0.05），這表明接種植物乳桿菌UR-3對發(fā)酵飼料中的營養(yǎng)物質(zhì)進行高效率的發(fā)酵，產(chǎn)生大量的乳酸，此結(jié)論與肖軻的試驗結(jié)果一致。

3.討論

3.1 植物乳桿菌發(fā)酵對 FLF 營養(yǎng)水平的影響

植物乳桿菌發(fā)酵成本低、效果好、對飼料營養(yǎng)成分破壞較小，還能提高飼料的轉(zhuǎn)化率和畜禽生長性能以及飼料的品質(zhì)。植物乳桿菌可以改善蛋白品質(zhì)、產(chǎn)生促生長因子，其在發(fā)酵飼料過程中產(chǎn)生乳酸，并將大分子蛋白質(zhì)降解為許多小分子物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，在試驗中，發(fā)酵飼料粗蛋白含量均有升高的趨勢，可能是由于植物乳桿菌在液體發(fā)酵過程中，不僅分解部分蛋白質(zhì)，同時還合成了一定量的蛋白質(zhì)。

閆征等研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌的生長受到抑制和乳酸產(chǎn)量下降的直接原因是終產(chǎn)物乳酸的不斷積累。熊素玉等研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌在pH值6.5~8.5、40℃培養(yǎng)時生長狀態(tài)好，而且發(fā)酵葡萄糖和乳糖產(chǎn)生乳酸，降低基質(zhì)的pH值，乳酸菌的生長從而受到抑制。在本研究中，植物乳桿菌液體飼料發(fā)酵前期代謝率提高，有許多乳酸產(chǎn)生；在植物乳桿菌液體飼料發(fā)酵中后期，植物乳桿菌代謝漸緩，乳酸量減少。這與許梅等的試驗結(jié)論一致。

3.2 發(fā)酵條件對 FLF 營養(yǎng)水平的影響

發(fā)酵溫度是影響FLF營養(yǎng)價值的重要條件之一。在本試驗中，發(fā)酵溫度在 25~37℃時，各項指標(biāo)顯著性高（P<0.05），溫度和各項指標(biāo)呈正相關(guān)關(guān)系，但是我們未做37℃以上溫度條件的發(fā)酵試驗，因為發(fā)酵溫度太高，就會使菌種的繁殖速度快，菌種會快速老化，最終會影響FLF產(chǎn)品的品質(zhì)。

發(fā)酵時間是影響FLF營養(yǎng)價值的主要條件，發(fā)酵時間太短不利于菌種的生長繁殖，從而影響飼料中粗蛋白含量；若發(fā)酵時間太長，菌種會將蛋白質(zhì)降解成氨揮發(fā)掉，進而降低飼料中粗蛋白含量。

接種量決定FLF效果的好壞：接種量過少，發(fā)酵時雜菌會飛速生長，最終導(dǎo)致發(fā)酵失??；接種量過高，有益菌相互之間底物競爭，會降低產(chǎn)品品質(zhì)。

3.3 有待進一步研究的問題

本研究對植物乳桿菌UR-3在液態(tài)發(fā)酵飼料中的應(yīng)用作了初步的研究,目前該研究方向的相關(guān)報道較少，要使FLF進入工業(yè)化生產(chǎn)和商品化階段還有許多研究工作要做，需要解決的問題還有很多。

大量試驗表明，F(xiàn)LF作為一種新型的綠色環(huán)保飼料，不但以改善飼料的營養(yǎng)特性、提高仔豬的生產(chǎn)性能，而且能改善仔豬的腸道康并預(yù)防腹瀉。雖然目前FLF的相關(guān)研究尚處在初期探索階段，并局限于斷奶仔豬方面，但是相信隨著FLF加工機械和設(shè)備的不斷發(fā)展，生產(chǎn)技術(shù)的不斷完善，F(xiàn)LF將是一種理想的抗生素促生長因子替代品。

4.結(jié)論

本試驗通過正交試驗，確定了時間、溫度、接種量對植物乳桿菌FLF營養(yǎng)價值的影響。植物乳桿菌FLF的最佳發(fā)酵工藝組合條件為：發(fā)酵時間48h、接種量2.5%、溫度37℃。植物乳桿菌發(fā)酵飼料粗蛋白含量顯著高于未發(fā)酵飼料（P<0.05），粗蛋白含量由發(fā)酵前6.28%提高到6.94%；發(fā)酵飼料乳酸菌數(shù)量和乳酸含量顯著高于未發(fā)酵飼料（P<0.05），乳酸含量達到212.34mmol/L，生物量為21.62×109cfu/mL。本研究為植物乳桿菌制備液體發(fā)酵飼料提供合理的應(yīng)用技術(shù)參數(shù)，并為乳酸菌FLF產(chǎn)品的研發(fā)、應(yīng)用和推廣提供參考數(shù)據(jù)。

豬場發(fā)酵全價飼料變水料飼喂技術(shù)

今天給大家介紹豬場如何發(fā)酵全價飼料進行水料飼喂。

其實操作很簡單，將豬全價飼料（商品全價顆粒飼料、粉料均可，也可以自配全價飼料）與飲水采取1:3的比例，每噸豬全價飼料（干）加入0.5-1包“99多功能飼料發(fā)酵劑”（500克/包，市場售價約25元），加入發(fā)酵罐后進行攪拌混合均勻，在25℃以上發(fā)酵罐中密閉發(fā)酵6小時以上，直接飼喂?？梢栽缟巷曃雇旰蟀l(fā)酵下午飼喂的料，下午飼喂完后發(fā)酵第二早上飼喂的料，如此循環(huán)進行。

豬場全價料發(fā)酵技術(shù)優(yōu)勢：

提高飼料利用率，料肉比減低0.3左右；根據(jù)豬場個性需求和豬場非常規(guī)飼料原料，例如可以加入牧草、果渣、豆渣等進行飼喂，這些廉價飼料可以使用比例一般在10%-30%。還可以加入中草藥到其中（如“御瘟湯”，每噸豬飼料加入1-1.5公斤效果更好）。

豬場臭味氨氣少，常見疾病發(fā)病率顯著降低，降低飼料和用藥養(yǎng)殖成本，減少抗生素使用投入形成無抗養(yǎng)殖，提高養(yǎng)殖效益。

改善肉的品質(zhì)，保水好，豬肉口感好。

發(fā)酵成水料后，可以進行人工、半自動、自動化液態(tài)飼喂系統(tǒng)。

規(guī)?；B(yǎng)殖可以采用自動化液態(tài)飼喂系統(tǒng)，這種模式采用自動化稱重技術(shù)，將每天所需飼料和飲水以1:3的比例配好;通過自動計量，將每圈豬所需飼料直接供到豬舍;

自動化液態(tài)飼喂系統(tǒng)優(yōu)勢：通過發(fā)酵，預(yù)防濕料霉變;無需飼養(yǎng)人員搬運飼料，節(jié)省飼養(yǎng)人工成本;解決了粉劑飼料的浪費問題，減少呼吸道疾病發(fā)病率。

發(fā)酵設(shè)備成本低，操作簡單，易操作，普通飼養(yǎng)員都能學(xué)會;還可以充分使用果渣、豆渣、蔬菜葉、牧草等食品下腳料等廉價飼料，降低養(yǎng)殖成本;解決飼養(yǎng)人員不足及難管理的問題。

各種養(yǎng)豬規(guī)模的養(yǎng)殖場都可以運用。

下圖是廣西助農(nóng)公司在南寧市武鳴區(qū)的客戶現(xiàn)場圖，這個客戶主要以發(fā)酵廉價飼料+配合飼料的飼喂模式。

下圖是廣西助農(nóng)公司在桂林市荔浦縣客戶的現(xiàn)場圖，這個客戶全部使用短時間發(fā)酵全價飼料+養(yǎng)豬專用復(fù)合益生菌+水飼養(yǎng)黑豬。

【視頻】部分發(fā)酵飼料養(yǎng)豬雞鴨帶給你無臭味健康無抗養(yǎng)殖效果

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