1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在安徽省馬鞍山市金農(nóng)牧業(yè)有限公司羊場(chǎng)進(jìn)行,在預(yù)飼時(shí)免疫注射三聯(lián)四防疫苗,并注射伊維菌素溶液(0.2mg/kg)進(jìn)行驅(qū)蟲處理。每7只羊?yàn)閘圈飼養(yǎng),保證有足夠運(yùn)動(dòng)空間,每天定時(shí)投喂精料和粗料。每天根據(jù)前1天料盆內(nèi)剩余料重新調(diào)整飼喂量,保證其自由采食和飲水,定期消毒。

1.4 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能

每天準(zhǔn)確記錄每組羔羊采食量,觀察羔羊生長(zhǎng)情況,分別于試驗(yàn)期第1、7、14、21、28天稱量每只羔羊體重,并計(jì)算精料平均日采食量、粗料平均日采食量、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 血清生化指標(biāo)

分別于試驗(yàn)期第1、14、28天08:00,對(duì)所有羔羊空腹進(jìn)行頸靜脈采血10mL,靜置30min,以3000r/min離心,收集血清,置于-20℃保存待測(cè)。采用邁瑞B(yǎng)SL-220全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)活性及總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素(UREA)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量的測(cè)定。血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)、白細(xì)胞介素1(IL-1)、白細(xì)胞介素2(IL-2)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)的含量均采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)完成,試劑盒由南京森貝伽生物科技有限公司提供,具體步驟參照說明書。

1.4.3 養(yǎng)分表觀消化率

在試驗(yàn)期最后3d,每組隨機(jī)選取3只羔羊進(jìn)行消化代謝試驗(yàn),每組羔羊?yàn)橥涣吓栾曃?根據(jù)剩料量,準(zhǔn)確計(jì)算采食量。采用直腸取糞法收集糞樣,所收集到的鮮糞準(zhǔn)確稱重,混勻,取總重量的20%作為樣品,并按100mL/kg加入10%的鹽酸,置于-20℃保存。在65℃條件下烘干48h,粉碎后置于室溫下回潮24h,裝于樣品袋中備用,飼糧和糞便樣品中的干物質(zhì)(DM)、粗蛋白質(zhì)(CP)、粗脂肪(EE)、中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)含量測(cè)定分別按照GB/T 6435—2006、GB/T 6432—1994、GB/T 6433—2006、GB/T 20806—2006、NY/T 1459—2007的方法進(jìn)行。

養(yǎng)分表觀消化率(%)=100×(飼糧采食量×飼糧養(yǎng)分含量—日排糞量×糞便養(yǎng)分含量)/(飼糧采食量×飼糧養(yǎng)分含量)。

1.4.4 胰腺消化酶活性

在試驗(yàn)期結(jié)束空腹稱重后每組隨機(jī)屠宰3只,按《家畜解剖及組織胚胎學(xué)》方法采集胰腺,準(zhǔn)確稱量并記錄重量。從頭、體、尾3個(gè)部位取0.2g左右的胰臟樣本,加入1.8mL生理鹽水用高速勻漿機(jī)配成10%的組織勻漿,經(jīng)2500r/min4℃離心15min,取上清液備用。胰腺淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性均采用試劑盒(南京森貝伽生物科技有限公司)進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定方法參照說明書進(jìn)行。淀粉酶活性單位定義為:在37℃條件下,樣品中每毫克組織蛋白質(zhì)與底物作用30min,水解10mg淀粉定義為1個(gè)活性單位(U/mg);脂肪酶活性單位定義為:在37℃條件下,樣品中每毫克組織蛋白質(zhì)與底物反應(yīng)1min,每消耗1μmol底物為1個(gè)活性單位(U/mg);糜蛋白酶活性單位定義為:在37℃條件下,樣品中每毫克組織蛋白質(zhì)每分鐘分解蛋白質(zhì)生產(chǎn)1μg氨基酸定義為1個(gè)活性單位(U/mg)。

1.4.5 瘤胃發(fā)酵參數(shù)

在試驗(yàn)期結(jié)束后每組隨機(jī)屠宰3只收集瘤胃液,用3層紗布過濾,1500r/min離心15min,取上清液于-20℃保存待測(cè)。瘤胃液氨態(tài)氮(NH3-N)的含量的測(cè)定采用改進(jìn)的比色法測(cè)定。瘤胃液揮發(fā)性脂肪酸(VFA)含量采用氣相色譜儀-質(zhì)譜儀(GCMSISQLT)檢測(cè)[色譜柱(TGWAX,30m×0.25mm,0.25μm);自動(dòng)進(jìn)樣器TriPlusRSH;檢測(cè)器MSisq。標(biāo)準(zhǔn)品包括:乙酸、丙酸、異丁酸、正丁酸、異戊酸、正戊酸標(biāo)準(zhǔn)品]。

色譜條件:載氣氦氣(恒流模式、總流量0.8mL/min);進(jìn)樣口溫度200℃;離子源溫度200℃;連接線溫度250℃;采用程序升溫,初始溫度120℃,6min,以5℃/min的速率升溫至150℃,運(yùn)行2min;進(jìn)樣量為1μL;分流比75∶1;質(zhì)譜:EI源;轟擊電壓:70eV;單離子掃描模式:定量離子60、73。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

與分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-wayANOVA),并采用LSD法進(jìn)行多重比較,試驗(yàn)數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,分別以P<0.05和P<0.01作為差異顯著和極顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 富硒酵母和枯草芽孢桿菌對(duì)湖羊羔羊生長(zhǎng)性能的影響

由表2可以看出,各組始重差異不顯著(P>0.05)。與對(duì)照組相比,富硒酵母組和枯草芽孢桿菌組羔羊的末重極顯著提高(P<0.01),平均日增重顯著提高(P<0.05),精料和粗料平均日采食量變化均不顯著(P>0.05),但是精料和粗料的料重比顯著或極顯著降低(P<0.05或P<0.01)。

2.3 富硒酵母和枯草芽孢桿菌對(duì)湖羊羔羊養(yǎng)分表觀消化率的影響

由表5可知,相比對(duì)照組,富硒酵母組和枯草芽孢桿菌組的粗蛋白質(zhì)、酸性洗滌纖維和中性洗滌纖維表觀消化率顯著提高(P<0.05),干物質(zhì)的表觀消化率極顯著提高(P<0.01);枯草芽孢桿菌組的粗脂肪表觀消化率顯著提高(P<0.05)。

2.4 富硒酵母和枯草芽孢桿菌對(duì)湖羊羔羊胰腺消化酶活性的影響

由表6可知,與對(duì)照組相比,枯草芽孢桿菌組胰腺脂肪酶活性和富硒酵母組胰腺胰蛋白酶活性均顯著提高(P<0.05),富硒酵母組和枯草芽孢桿菌組胰腺淀粉酶活性變化不顯著(P>0.05),但在數(shù)值上略有升高。

2.5 富硒酵母和枯草芽孢桿菌對(duì)湖羊羔羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

由表7可知,與對(duì)照組相比,富硒酵母組和枯草芽孢桿菌組羔羊瘤胃液NH3-N、乙酸、丙酸、異丁酸、正丁酸含量顯著提高(P<0.05);富硒酵母組和枯草芽孢桿菌組瘤胃液的異戊酸、正戊酸含量變化不顯著(P>0.05),但在數(shù)值上略有提高。

3 討論

3.1 富硒酵母和枯草芽孢桿菌對(duì)湖羊羔羊生長(zhǎng)性能的影響

微生態(tài)制劑可以促進(jìn)多種在腸道消化吸收中占主導(dǎo)地位的厭氧菌的生長(zhǎng)繁殖,從而促進(jìn)腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝吸收,提高機(jī)體的生長(zhǎng)性能。Shi等研究發(fā)現(xiàn),添加酵母硒可以顯著提高太白黑羊羔羊的的生長(zhǎng)性能。Stewart研究發(fā)現(xiàn)在母羊飼糧中添加富硒酵母能夠顯著提高羔羊的平均日增重。仇武松等研究結(jié)果表明,在飼糧中添加枯草芽孢桿菌可以降低羔羊的料重比,從而提高生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)研究結(jié)果與上述報(bào)道一致。然而,也有試驗(yàn)結(jié)果顯示,微生態(tài)制劑對(duì)畜禽的生長(zhǎng)性能沒有顯著影響。不同的研究結(jié)果存在差異,主要是可能與微生態(tài)制劑的菌種特性、添加比例以及動(dòng)物的日齡、生理狀態(tài)和營(yíng)養(yǎng)因素有關(guān)。從本試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,飼糧中添加富硒酵母和枯草芽孢桿菌能夠降低料重比,顯著提高羔羊的生長(zhǎng)性能。但如何發(fā)揮其最佳使用效果,還需對(duì)微生態(tài)制劑的添加劑量和使用階段進(jìn)一步研究確定。

3.2 富硒酵母和枯草芽孢桿菌對(duì)湖羊羔羊血清指標(biāo)的影響

本試驗(yàn)對(duì)照組、富硒酵母組、枯草芽孢桿菌組之間的血清TP、ALB、GLB含量及ALT、AST活性無(wú)顯著性差異,說明微生態(tài)制劑對(duì)湖羊血清中的蛋白質(zhì)含量無(wú)顯著影響。細(xì)胞因子是免疫系統(tǒng)的重要調(diào)節(jié)因子,能夠影響免疫應(yīng)答的類型和水平。王蘭惠的研究發(fā)現(xiàn)給綿羊灌注酵母培養(yǎng)物能夠提高血清IgA、IgG和IL-6的含量,顯著提高血清IL-2、IFN-γ含量。Rajput等研究發(fā)現(xiàn),枯草芽孢桿菌可以提高紹興鴨血清中IL-2的含量。Hall等研究發(fā)現(xiàn),在奶牛飼糧中補(bǔ)硒后可增加奶牛血清中的IgG含量。在本試驗(yàn)中富硒酵母組和枯草芽孢桿菌組血清中IgA、IgG和IgM均顯著高于對(duì)照組,這表明微生態(tài)制劑可以提高羔羊機(jī)體的免疫力。血清中GSH-Px和SOD活性是反映動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力的重要指標(biāo)。劉強(qiáng)等研究發(fā)現(xiàn)在飼糧中添加富硒酵母能夠顯著提高血清GSH-Px、SOD活性,顯著降低血清MDA含量。Faixová等在飼糧中添加富硒酵母,顯著提高了羊血清GSH-Px活性。任民等研究發(fā)現(xiàn),在飼糧中添加枯草芽孢桿菌能夠顯著提高血清GSH-Px活性,顯著降低血清MDA含量。本試驗(yàn)中,富硒酵母組和枯草芽孢桿菌組羔羊血清中的GSH-Px和SOD活性也顯著提高,血清MDA含量顯著下降,這表明富硒酵母和枯草芽孢桿菌能夠提高湖羊羔羊的抗氧化能力。

3.3 富硒酵母和枯草芽孢桿菌對(duì)湖羊羔羊養(yǎng)分表觀消化率和胰腺消化酶活性的影響

國(guó)內(nèi)外的一些研究表明,在畜禽飼糧中合理添加富硒酵母和枯草芽孢桿菌可以顯著提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率。張麗娟等研究發(fā)現(xiàn),在飼糧中添加富硒酵母能夠提高酸性洗滌纖維的表觀消化率。Molnár等研究發(fā)現(xiàn),在肉雞飼糧中添加枯草芽孢桿菌夠提高飼料轉(zhuǎn)化效率。Cho等研究發(fā)現(xiàn),在豬飼糧中添加枯草芽孢桿能夠提高飼糧蛋白質(zhì)消化率。微生態(tài)制劑在腸道內(nèi)產(chǎn)生的消化酶和促生長(zhǎng)因子等活性物質(zhì),可協(xié)同增強(qiáng)對(duì)養(yǎng)分的消化和吸收。本試驗(yàn)中,富硒酵母組和枯草芽孢桿菌組羔羊養(yǎng)分表觀消化率也顯著提升。但是,也有微生態(tài)制劑的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)沒有對(duì)養(yǎng)分消化產(chǎn)生影響,這或許與不同的養(yǎng)殖管理模式有關(guān)。

淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶作為3類主要的胰消化酶,經(jīng)胰液分泌與電解質(zhì)一起進(jìn)入近端小腸中,在蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物的消化中起重要的作用。劉翠玲等研究發(fā)現(xiàn),枯草芽孢桿菌可以顯著提高鯉幼魚胰臟蛋白酶、后腸淀粉酶的活性。李衛(wèi)芬等研究發(fā)現(xiàn),枯草芽孢桿菌可以顯著提高草魚胰臟中脂肪酶和胰蛋白酶活性。本試驗(yàn)中,富硒酵母組和枯草芽孢桿菌組胰蛋白酶和脂肪酶活性有顯著提高,說明對(duì)湖羊羔羊消化功能有促進(jìn)作用。

3.4 富硒酵母和枯草芽孢桿菌對(duì)湖羊羔羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

瘤胃液NH3-N是飼糧中多種蛋白質(zhì)在瘤胃發(fā)酵的重要產(chǎn)物,能夠?yàn)榇蠹s50%的瘤胃微生物合成菌體蛋白質(zhì)提供氮源。反芻動(dòng)物瘤胃液NH3-N含量正常數(shù)值范圍一般維持在6.3~27.0mg/dL。周傳社等研究發(fā)現(xiàn),在飼糧添加酵母培養(yǎng)物可以提高山羊瘤胃液NH3-N含量,對(duì)于調(diào)節(jié)山羊瘤胃發(fā)酵有促進(jìn)作用。鄧露芳研究發(fā)現(xiàn),在奶牛飼糧添加納豆枯草芽孢桿菌能夠提高瘤胃液NH3-N含量,這也說明枯草芽孢桿菌改善瘤胃發(fā)酵參數(shù)。反芻動(dòng)物瘤胃對(duì)養(yǎng)分的消化吸收以及微生物動(dòng)力學(xué)過程中可產(chǎn)生大量的揮發(fā)性脂肪酸,其主要作用為供能和維持瘤胃環(huán)境。朱翱翔等研究發(fā)現(xiàn),酵母硒可以提高湖羊母羊瘤胃液中乙酸和總揮發(fā)性脂肪酸含量,從而促進(jìn)瘤胃發(fā)酵。研究發(fā)現(xiàn),枯草芽孢桿菌可以提高奶牛瘤胃液NH3-N、總揮發(fā)性脂肪酸的含量,促進(jìn)瘤胃發(fā)酵。本試驗(yàn)中,富硒酵母組和枯草芽孢桿菌組羔羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)得到改善,說明富硒酵母和枯草芽孢桿菌對(duì)湖羊瘤胃發(fā)酵有促進(jìn)作用。

4 結(jié)論

①飼糧中添加富硒酵母和枯草芽孢桿菌能夠提高斷奶湖羊羔羊的平均日增重,降低料重比。

②飼糧中添加富硒酵母和枯草芽孢桿菌能夠提高斷奶湖羊羔羊血清中免疫球蛋白含量和抗氧化酶活性。

③飼糧中添加富硒酵母和枯草芽孢桿菌能夠提高斷奶湖羊羔羊?qū)︷B(yǎng)分的表觀消化率、胰腺消化酶活性和瘤胃發(fā)酵參數(shù),從而提高消化功能。

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