久久www成人看片,天天做夜夜操,97中文字幕在线,黄色的视频免费看

導(dǎo)讀

    抗生素在畜牧生產(chǎn)中的濫用，導(dǎo)致抗藥、耐藥、殘留及超級(jí)病菌的產(chǎn)生，已引起了世界各國(guó)的普遍關(guān)注。許多國(guó)家已經(jīng)禁止抗生素作為飼料添加劑，尋找一種綠色環(huán)保型抗生素替代品———微生態(tài)制劑也就應(yīng)運(yùn)而生。益生菌是一種微生物補(bǔ)充劑，通過(guò)改善宿主腸道微生物菌群平衡，對(duì)宿主產(chǎn)生有益的效果。益生菌之所以對(duì)人和動(dòng)物體的健康有益，與其生物學(xué)特性緊密相關(guān)，可幫助宿主提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化利用率。益生菌能黏附在人和動(dòng)物腸道黏膜上生長(zhǎng)繁殖，是其產(chǎn)生有益作用的前提之一。當(dāng)益生菌在腸道內(nèi)定植并大量繁殖后，可競(jìng)爭(zhēng)性地與病原微生物爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并產(chǎn)生相應(yīng)的細(xì)菌素等生物活性物質(zhì)，來(lái)抑制病原微生物的生長(zhǎng)和繁殖，從而提高機(jī)體的健康水平。譬如乳酸菌產(chǎn)生的乳酸等有機(jī)酸能降低腸道pH值，在動(dòng)物處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)亦能維持腸道內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，防止病原菌因勢(shì)而起；還有一些益生菌能產(chǎn)生抗菌肽，從而抑制有害菌的生長(zhǎng)。益生菌能刺激腸道黏膜，產(chǎn)生黏膜免疫應(yīng)答，增強(qiáng)體液和細(xì)胞免疫，促進(jìn)抗炎因子的產(chǎn)生，減少炎癥反應(yīng)。研究表明乳酸菌能激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)對(duì)致病菌的殺滅作用，提高黏膜免疫相關(guān)因子的表達(dá)水平，從而提高機(jī)體免疫力。

    仔豬由于胃腸道發(fā)育不健全，同時(shí)在其生長(zhǎng)過(guò)程還伴隨著斷奶、飼料變化、轉(zhuǎn)舍等應(yīng)激因素，將會(huì)導(dǎo)致仔豬腸道菌群紊亂，易引發(fā)疾病，致使仔豬成活率低。目前，益生菌廣泛應(yīng)用于我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)中。研究發(fā)現(xiàn)，在哺乳仔豬的教槽料中添加復(fù)合益生菌，可提高仔豬日增重，降低仔豬腹瀉率和死亡率，并降低仔豬生長(zhǎng)前期糞便中大腸桿菌數(shù)量及提高乳酸菌數(shù)量，對(duì)改善腸道健康具有重要意義。另?yè)?jù)報(bào)道，利用嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌灌服哺乳仔豬，發(fā)現(xiàn)益生菌能顯著提高仔豬日增重、血清免疫球蛋白含量及腸道乳酸桿菌數(shù)量，降低仔豬腹瀉率和糞便中大腸桿菌數(shù)量，并對(duì)小腸絨毛的發(fā)育有促進(jìn)作用。由于不同的益生菌及其組合具有不同的益生功能，研究和開(kāi)發(fā)新的復(fù)合益生菌對(duì)仔豬的健康生產(chǎn)具有重要意義。

    本研究根據(jù)益生菌對(duì)病原菌生長(zhǎng)和繁殖的抑制作用，制成干酪乳桿菌和糞腸球菌的復(fù)合液體制劑，以哺乳仔豬為試驗(yàn)對(duì)象，探索益生菌對(duì)乳仔豬生長(zhǎng)性能和健康狀況的影響，為哺乳仔豬健康生長(zhǎng)提供良好的理論和實(shí)踐指導(dǎo)。

1.1 菌種選擇

     試驗(yàn)選用干酪乳桿菌（Lactobacillus Casei）和糞腸球菌（Enterococcus faecalis）菌種均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，并由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與生物技術(shù)研究室保存。根據(jù)本研究室前期的工作基礎(chǔ)，確定干酪乳桿菌和糞腸球菌的比例為3∶1時(shí)，對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)的抑制能力最強(qiáng)，并以此配比進(jìn)行下一步的哺乳仔豬試驗(yàn)。

1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

     培養(yǎng)干酪乳桿菌和糞腸球菌的乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基（MRS）組成：胰蛋白胨15ｇ、酵母浸粉1ｇ、葡萄糖20ｇ、吐溫－80 1mL、磷酸氫二鉀2ｇ、乙酸鈉5ｇ、檸檬酸銨2ｇ、硫酸鎂0.2ｇ、硫酸錳0.05ｇ，用蒸餾水定容至1L，在MRS液態(tài)培養(yǎng)基中加入1.5％瓊脂可制備MRS固態(tài)培養(yǎng)基，2種培養(yǎng)基在121℃、0.15MPa高壓蒸汽滅菌20min備用。干酪乳桿菌和糞腸球菌37℃靜置培養(yǎng)24ｈ，測(cè)定培養(yǎng)液的活菌數(shù)，分裝并于4℃保存?zhèn)溆茫褂们罢{(diào)整2種菌活菌數(shù)為1×10⁹ CFU／mL。糞便中乳酸菌數(shù)量的測(cè)定采用厭氧管滾管培養(yǎng)法，在37℃下靜置培養(yǎng)48ｈ。微生物數(shù)量的表示方法，以每1mL或1ｇ樣品中所含的菌落數(shù)（CFU）為標(biāo)準(zhǔn)，以自然對(duì)數(shù)值（Lｇ）表示。

    培養(yǎng)大腸桿菌的伊紅美藍(lán)鑒別培養(yǎng)基（EMB，北京奧博星）組成：稱取EMB 42.5ｇ，加入1L蒸餾水，在121℃、0.15MPa高壓滅菌20min，制備含培養(yǎng)基的平皿備用。大腸桿菌37℃靜置培養(yǎng)48ｈ，其菌落呈現(xiàn)亮紫色。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及動(dòng)物的飼養(yǎng)管理

     試驗(yàn)選擇品種相同（長(zhǎng)白×大白×杜洛克三元雜交）、出生日期和體質(zhì)量相近的仔豬15窩，每窩選擇8頭，共120頭仔豬，分為4個(gè)處理組，每個(gè)處理組15個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)2頭仔豬（公母各半）。對(duì)照組，灌服生理鹽水；試驗(yàn)Ⅰ組：灌服干酪乳桿菌培養(yǎng)液；試驗(yàn)Ⅱ組：灌服糞腸球菌培養(yǎng)液；試驗(yàn)Ⅲ組：灌服干酪乳桿菌和糞腸球菌混合培養(yǎng)液。

    試驗(yàn)從仔豬出生開(kāi)始持續(xù)至21日齡斷奶，并延續(xù)1周，試驗(yàn)期為28ｄ。所選仔豬均在同一豬舍內(nèi)，舍內(nèi)清潔干燥、通風(fēng)良好，舍內(nèi)溫度和相對(duì)濕度分別為（25±2）℃和65％～70％。仔豬保育箱內(nèi)第1周和第2周溫度分別為（33±2）℃和（30±2）℃，然后維持在（25±2）℃。試驗(yàn)期間飼養(yǎng)管理和免疫程序均按規(guī)模化豬場(chǎng)統(tǒng)一要求執(zhí)行。仔豬出生第1天灌服1mL益生菌制劑，以后每隔7ｄ灌服1次，每次遞增1mL至21日齡，對(duì)照組灌服生理鹽水。仔豬7日齡后開(kāi)始添加教槽料至28日齡，期間自由采食和飲水。

1.4 生長(zhǎng)性能的測(cè)定

    在仔豬出生后，稱取每頭仔豬的初始體質(zhì)量；在21，28日齡時(shí)，分別稱取每頭仔豬的體質(zhì)量，并計(jì)算仔豬的日增重。每天觀察仔豬精神狀態(tài)及腹瀉情況（以糞樣顏色及是否水樣等為準(zhǔn)），計(jì)算腹瀉率及死亡率。腹瀉率＝仔豬腹瀉頭次／試驗(yàn)頭數(shù)／試驗(yàn)天數(shù)×100％；死亡率＝仔豬死亡頭數(shù)／試驗(yàn)頭數(shù)×100％。

1.5 胃腸道消化酶活性和pH值的測(cè)定

    選擇對(duì)照組和復(fù)合益生菌組21日齡仔豬各3頭，心臟放血處死，采集消化道各段的內(nèi)容物各5ｇ，分別于4℃和－20℃保存，用于測(cè)定各腸道內(nèi)容物中微生物數(shù)量和消化酶活性。蛋白酶的測(cè)定參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（1999）推薦的中性蛋白酶活的測(cè)定方法，即福林法。蛋白酶活性的定義為：在40℃條件下，每1min產(chǎn)生1μｇ酪氨酸定義為1個(gè)蛋白酶活力單位（U）。蛋白酶活（U／ｇ）＝測(cè)得的酪氨酸含量／反應(yīng)時(shí)間×4×樣品稀釋倍數(shù)／樣質(zhì)量。淀粉酶活性采用DNS法，淀粉酶活性定義為每1min產(chǎn)生1ｍｇ葡萄糖所用酶量為1個(gè)酶活力單位（U）。淀粉酶活（U／ｇ）＝樣品中還原糖含量×樣品稀釋液總體積×稀釋倍數(shù)／樣品質(zhì)量／測(cè)定所用酶體積／5。另外，取適量胃腸道內(nèi)容物于試管中，用pHＳ－2Ｃ酸度計(jì)測(cè)定樣品pH值。

1.6 糞樣及胃腸道微生物菌群的測(cè)定

    于21，28日齡，每組分別采集5頭仔豬的無(wú)污染糞樣5ｇ，于4℃保存，用于乳酸菌和大腸桿菌的活菌數(shù)測(cè)定。具體操作如下：分別準(zhǔn)確稱取0.5ｇ樣品加入4.5mL生理鹽水（稀釋液測(cè)定大腸桿菌）或MRS溶液（稀釋液測(cè)定乳酸菌），依次進(jìn)行10倍梯度稀釋至1×10^-6。采用稀釋涂布平板法和伊紅－美藍(lán)固態(tài)培養(yǎng)基測(cè)定大腸桿菌活菌數(shù)；利用厭氧管和固態(tài)MRS培養(yǎng)基測(cè)定乳酸菌活菌數(shù)。2種菌分別在37℃培養(yǎng)48ｈ，然后進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.7 血清生化指標(biāo)的測(cè)定

   在仔豬21日齡斷奶當(dāng)天，每組選取5頭仔豬進(jìn)行前腔靜脈采血，血液于4℃傾斜放置過(guò)夜，分離上層血清于－20℃保存?zhèn)溆谩＠萌詣?dòng)血液生化分析儀進(jìn)行血清各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析

    數(shù)據(jù)分析采用SPSS軟件進(jìn)行方差統(tǒng)計(jì)分析，各處理組間平均值采用Duncan氏多重比較進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果用（ｘ±ｓｘ）表示，以P<0.05表示差異顯著。

2.1 益生菌對(duì)哺乳仔豬生產(chǎn)性能的影響

2.1.1 益生菌對(duì)哺乳仔豬增重的影響

    由表1可知，試驗(yàn)組仔豬21，28日齡平均日增重均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），其中以試驗(yàn)Ⅲ組最高，3個(gè)試驗(yàn)組之間差異不顯著（P>0.05）。