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無(wú)抗發(fā)酵飼糧對(duì)豬小腸黏膜形態(tài)和杯狀細(xì)胞 的影響

2021-02-03 10:32:51      點(diǎn)擊:

摘 要:本試驗(yàn)旨在研究無(wú)抗發(fā)酵飼糧對(duì)豬小腸黏膜形態(tài)和杯狀細(xì)胞的影響。試驗(yàn)選取遺傳背景相似的初生健康乳豬 120 頭,隨 機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組,每組 6 個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù) 10 頭豬。對(duì)照組飼喂含抗生素的基礎(chǔ)飼糧,試驗(yàn)組飼喂以 10% 發(fā)酵飼糧代替部分 無(wú)抗生素基礎(chǔ)飼糧的試驗(yàn)飼糧,營(yíng)養(yǎng)和能量水平調(diào)到與對(duì)照組相當(dāng)。結(jié)果表明:1)試驗(yàn)組和對(duì)照組在小腸黏膜形態(tài)上有一定的差異。 2)在 44日齡時(shí),試驗(yàn)組空腸絨毛高度比對(duì)照組提高 7.19%(P <0.05)。在 44和 75日齡時(shí),試驗(yàn)組回腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組( P < 0.05)。 3)對(duì)照組十二指腸、空腸、回腸隱窩深度均高于試驗(yàn)組,但差異不顯著(P > 0.05)。4)在 44 日齡時(shí),試驗(yàn)組回腸 絨毛高度 / 隱窩深度(V/C)比對(duì)照組提高 17.18%(P < 0.01)。5)在 44 日齡時(shí),對(duì)照組十二指腸、空腸和回腸黏膜上皮間杯狀細(xì) 胞數(shù)量極顯著高于試驗(yàn)組(P < 0.01)。在 75 日齡時(shí),對(duì)照組十二指腸黏膜上皮間杯狀細(xì)胞數(shù)量極顯著高于試驗(yàn)組(P < 0.01)。 綜上所述,無(wú)抗發(fā)酵飼糧能改善小腸黏膜形態(tài),增大吸收面積,從而促進(jìn)小腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。 

關(guān)鍵詞:無(wú)抗發(fā)酵飼糧;豬;小腸黏膜;杯狀細(xì)胞

抗生素在飼糧中的廣泛使用,造成細(xì)菌耐藥性、食品安全、 公共衛(wèi)生和環(huán)境污染等問(wèn)題,農(nóng)業(yè)部農(nóng)辦醫(yī) [2018]13 號(hào)明確指 出 2020 年藥物飼料添加劑全部退出,飼糧中禁止添加抗生素。 因此,研發(fā)安全、無(wú)殘留、能有效替代抗生素的新型飼料添加 劑已成為發(fā)展趨勢(shì)。由于益生菌發(fā)酵飼糧通過(guò) 1 種或多種益生 菌的發(fā)酵,飼糧中富含更多的活性益生菌菌體、有益代謝產(chǎn)物, 同時(shí)可消除飼糧中的抗?fàn)I養(yǎng)因子,能夠促生長(zhǎng)和維持動(dòng)物健康, 而益生菌是替代抗生素潛力最大的一種添加劑。在動(dòng)物機(jī)體中, 小腸是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的主要場(chǎng)所,小腸黏膜狀態(tài)與營(yíng)養(yǎng)物 質(zhì)的吸收密切相關(guān),腸道杯狀細(xì)胞是一種分泌細(xì)胞,其分泌的 黏蛋白(MUC)和三葉肽因子等形成腸道黏液層,對(duì)維持腸道黏 膜穩(wěn)態(tài)起著重要的作用。本試驗(yàn)通過(guò)觀(guān)察不同日齡豬的腸道黏 膜形態(tài),測(cè)量小腸黏膜的絨毛高度、隱窩深度和絨毛高度 / 隱窩深度(V/C)及腸絨毛上皮間杯狀細(xì)胞的數(shù)量,來(lái)探討無(wú)抗發(fā) 酵飼糧對(duì)豬腸道黏膜的影響,為其代替市場(chǎng)上含有抗生素的飼 糧提供理論依據(jù)。

1 材料與方法 

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及設(shè)計(jì) 

選取 120 頭體重相近的 “長(zhǎng) × 大”初生健康乳豬,隨機(jī) 分為試驗(yàn)組和對(duì)照組,每組 6 個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù) 10 頭豬,試驗(yàn) 分為 3 個(gè)階段即哺乳階段(0 ~ 28 日齡)、斷奶階段(29 ~ 44 日齡)、保育階段(45 ~ 75 日齡),試驗(yàn)周期共 75d。各組試 驗(yàn)仔豬以窩為單位,7 ~ 28 日齡飼喂哺乳仔豬飼糧,29 日齡轉(zhuǎn) 群至保育舍,飼喂斷奶仔豬飼糧至試驗(yàn)結(jié)束。對(duì)照組和試驗(yàn)組 同舍飼養(yǎng),各重復(fù)室內(nèi)均勻分布,條件盡可能一致,自由采食,自主飲水。 

1.2 試驗(yàn)飼糧 

無(wú)抗發(fā)酵飼糧的生產(chǎn)方式為:將玉米與豆粕按各 50% 的比 例進(jìn)行稱(chēng)量、粉碎和混合,作為發(fā)酵底物;發(fā)酵菌種由鼠李糖 乳桿菌、植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酵母菌 組成,料水比為 1.00 ∶ 0.45;35℃ 厭氧發(fā)酵 60h,委托新鄉(xiāng)市酵守康飼料有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)組飼糧加入以 10% 發(fā)酵飼糧來(lái) 替代部分不含抗生素基礎(chǔ)飼糧,對(duì)照組飼喂含抗生素的基礎(chǔ)飼 糧 (50mg/kg 金霉素和 100mg/kg 吉他霉素),并調(diào)整試驗(yàn)組各 階段的飼糧營(yíng)養(yǎng)水平與對(duì)照組相同。玉米-豆粕型混合飼糧發(fā) 酵前后營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表 1。哺乳仔豬和斷奶仔豬基礎(chǔ)飼糧組成及 營(yíng)養(yǎng)水平分別見(jiàn)表 2、表 3。

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1.3 樣品采集與處理 

在仔豬出生后的第 5、15、25、44 和 75 分別于 2 組的每個(gè) 重復(fù)中隨機(jī)抽取 1 頭豬稱(chēng)重后宰殺,取十二指腸、空腸和回腸 各段約 2cm,于 4% 多聚甲醛液中固定。 

1.4 組織切片制作 

樣品在 4% 多聚甲醛溶液中固定 48h 后,將組織修整成 7mm 小塊;自來(lái)水沖洗固定 12h;常規(guī)梯度酒精脫水、透明、石蠟 包埋后切片,進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色和高碘酸雪夫氏(PAS)染色。 

1.5 腸黏膜檢測(cè)指標(biāo) 

各階段的十二指腸、空腸和回腸每個(gè)樣本中選取 5 張切 片,低倍鏡下每張切片選出 5 個(gè)不同視野觀(guān)察腸黏膜形態(tài),測(cè) 量絨毛高度、隱窩深度、V/C 和杯狀細(xì)胞數(shù)量。觀(guān)察過(guò)程中應(yīng) 注意所選取的腸絨毛長(zhǎng)度應(yīng)該基本一致,應(yīng)用 Nikon50i 顯微鏡 照相處理軟件進(jìn)行拍照。

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1.6 統(tǒng)計(jì)分析 

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用 SPSS 19.0 軟件進(jìn) 行 t 檢驗(yàn)分析,以P < 0.05 表示差異顯著,以P < 0.01 表示 差異極顯著。

2 結(jié)果與分析 

2.1 無(wú)抗發(fā)酵飼糧對(duì)豬小腸黏膜形態(tài)的影響 

試驗(yàn)組和對(duì)照組小腸黏膜形態(tài)變化上有一定的差異。由圖 1 可見(jiàn),2 組十二指腸不同的變化表現(xiàn)為:試驗(yàn)組腸絨毛較長(zhǎng), 呈明顯的葉狀結(jié)構(gòu),絨毛的游離端明顯膨大。絨毛體至腺體部 散在少量杯狀細(xì)胞,腸腺中的杯狀細(xì)胞增多。腸絨毛的固有層 中有較多散在的淋巴細(xì)胞。而對(duì)照組腸絨毛較短,呈指狀,絨 毛的游離緣有較多的杯狀細(xì)胞分散在柱狀細(xì)胞之間。2 組豬空 腸不同的變化表現(xiàn)為:試驗(yàn)組腸絨毛較粗,固有層發(fā)達(dá),其中 彌散大量淋巴細(xì)胞,腸腺部的固有層也有大量淋巴細(xì)胞,形成 淋巴組織樣結(jié)構(gòu)。對(duì)照組腸絨毛較細(xì),固有層不發(fā)達(dá),腸腺部 固有層內(nèi)淋巴細(xì)胞較少,呈散在狀,沒(méi)有形成淋巴組織樣結(jié)構(gòu)。 2 組回腸不同的變化表現(xiàn)為:試驗(yàn)組回腸絨毛較稀疏,絨毛的 固有層較發(fā)達(dá),其中分布大量淋巴細(xì)胞。腸腺基部的固有層中 有大量淋巴細(xì)胞集聚,并突破黏膜肌層,在固有層和黏膜下層 形成集合淋巴小結(jié)樣構(gòu)造。對(duì)照組回腸絨毛細(xì)長(zhǎng),數(shù)量較多, 排列較密。 在黏膜下層中見(jiàn)有淋巴小結(jié)形成,呈現(xiàn)孤立淋巴小 結(jié)樣構(gòu)造。 

2.2 無(wú)抗發(fā)酵飼糧對(duì)豬小腸絨毛高度的影響

如表 4 所示,自 25 日齡開(kāi)始,試驗(yàn)組十二指腸絨毛高度整 體都略高于對(duì)照組,但沒(méi)有達(dá)到差異顯著的水平(P > 0.05)。 在 44 日齡時(shí),試驗(yàn)組空腸絨毛高度比對(duì)照組提高 7.19 %(P < 0.05),其他日齡組間差異不顯著(P > 0.05)。在 44 和 75 日齡時(shí),試驗(yàn)組回腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組(P < 0.05), 其他日齡組間差異不顯著(P > 0.05) 。 

2.3 無(wú)抗發(fā)酵飼糧對(duì)豬小腸隱窩深度的影響

 如表 5 所示,對(duì)照組十二指腸、空腸、回腸隱窩深度均較 高于試驗(yàn)組,但差異不顯著(P > 0.05)。在 75 日齡時(shí),試驗(yàn) 組十二指腸和回腸隱窩深度比對(duì)照組分別降低 6.40% 和 5.98%, 但差異不顯著(P > 0.05) 。 

2.4 無(wú)抗發(fā)酵飼糧對(duì)豬小腸 V/C 的影響 

如表 6 所示,試驗(yàn)組十二指腸、空腸和回腸 V/C(除 15 日 齡十二指腸外)均高于對(duì)照組,但差異不顯著(P > 0.05)。 其中在 44 日齡時(shí),試驗(yàn)組回腸 V/C 比對(duì)照組提高 17.18%,差異 極顯著(P < 0.01) 。

 2.5 無(wú)抗發(fā)酵飼糧對(duì)豬小腸黏膜上皮間杯狀細(xì)胞數(shù)量的 影響 

小腸黏膜上皮的杯狀細(xì)胞分散在柱狀細(xì)胞之間,但也有連 續(xù)排列的杯狀細(xì)胞,一般靠近腸腺部位較為集中,胞核位于基 底部,呈高腳杯狀,被 PAS 染色法染成深紅色(圖 2)。在 25 日齡時(shí),試驗(yàn)組和對(duì)照組十二指腸絨毛體的中、下兩側(cè)部至腸 腺部見(jiàn)有較多的杯狀細(xì)胞,絨毛頂端的杯狀細(xì)胞較少,杯狀細(xì) 胞分泌的黏液被染成深紅色覆蓋在腸上皮表面,以對(duì)照組較顯 (圖 2-A、圖 2-B)。在 75 日齡時(shí),試驗(yàn)組空腸腸絨毛變短, 但較粗,排列較密集。杯狀細(xì)胞多分散于腸絨毛體兩側(cè)的吸收 細(xì)胞間,絨毛頂端少有杯狀細(xì)胞(圖 2-C)。對(duì)照組空腸絨毛較 粗大,呈葉狀。 在絨毛兩側(cè)的吸收細(xì)胞之間杯狀細(xì)胞數(shù)量增多, 有的呈連續(xù)排列,腸腺部杯狀細(xì)胞較為集中(圖 2-D)。在 75 日齡時(shí),回腸絨毛變短,較粗,絨毛的固有層中有大量淋巴細(xì)胞,絨毛頂端有腸上皮脫落現(xiàn)象(圖 2-E、圖 2-F)。試驗(yàn)組腸 絨毛呈錐狀,絨毛的兩側(cè)到腸腺部見(jiàn)有大量杯狀細(xì)胞,腸腺腔 的上皮細(xì)胞也被 PAS 染成深紅色(圖 2-E)。對(duì)照組回腸絨毛呈 短柱狀,較稀疏,絨毛的中、下部和腸腺部有較多的杯狀細(xì)胞, 至絨毛頂端脫落(圖 2-F)。

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如表 7 所示,在 44 日齡時(shí),對(duì)照組十二指腸、空腸和回腸 黏膜上皮間杯狀細(xì)胞數(shù)量極顯著高于試驗(yàn)組(P < 0.01)。在 75 日齡時(shí),對(duì)照組十二指腸黏膜上皮間杯狀細(xì)胞數(shù)量極顯著高 于試驗(yàn)組(P < 0.01)。其他日齡組間差異不顯著(P > 0.05)。

3 討 論 

小腸是豬對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收的主要場(chǎng)所,其功能的發(fā) 揮與其生理結(jié)構(gòu)是密切相關(guān)的,腸道屏障功能可以維持微生態(tài) 的平衡,所以腸道黏膜與動(dòng)物的健康至關(guān)重要,特別是小腸絨 毛高度、隱窩深度、V/C 及有效的吸收面積都是衡量其消化和 吸收功能高低的重要指標(biāo),腸道形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)的改變是造成消化 吸收功能和免疫功能差異的主要原因之一。腸絨毛和微絨毛的 存在極大地增加了小腸與食物的接觸表面積,腸絨毛變短時(shí), 腸上皮細(xì)胞數(shù)量隨之減少,其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收能力降低。絨毛根 部下陷至固有層形成的管形縮陷為小腸腺即隱窩,當(dāng)腸道絨毛 脫落,隱窩多能干細(xì)胞會(huì)分化成新的腸上皮細(xì)胞向絨毛頂端移行,形成新的絨毛。隱窩深度反映細(xì)胞的生成率,隱窩變淺表 明細(xì)胞成熟率上升,分泌功能增強(qiáng)。V/C 下降表明小腸的消化 吸收功能下降,比值升高表明消化吸收率增強(qiáng)。龐敏等研究表 明,斷奶應(yīng)激對(duì)仔豬的腸道黏膜形態(tài)有很大的影響,而飼喂益 生菌發(fā)酵飼糧可以顯著提高斷奶仔豬的腸道上皮絨毛高度,且 顯著提高 V/C。斷奶應(yīng)激會(huì)造成仔豬的絨毛萎縮,隱窩細(xì)胞分裂 過(guò)快,造成隱窩深度增加及 V/C 下降,嚴(yán)重影響小腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物 質(zhì)的消化吸收。益生菌發(fā)酵飼糧可以提高飼糧中有機(jī)酸含量, 降低 pH,進(jìn)而使斷奶仔豬胃液 pH 與消化道酸度發(fā)育水平趨于穩(wěn) 定,減少仔豬腹瀉和增強(qiáng)仔豬對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力。益 生菌發(fā)酵為減少斷奶仔豬應(yīng)激提供了一種營(yíng)養(yǎng)策略。鄧軍研究 表明,同時(shí)飼喂枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌可以提高十二指 腸和空腸的絨毛高度和降低空腸和回腸的隱窩深度,V/C 升高。 Feng 等研究發(fā)現(xiàn),飼喂發(fā)酵豆粕配合飼料可以顯著提高斷奶仔 豬小腸絨毛高度,提高 V/C。

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本試驗(yàn)結(jié)果顯示,在 44 日齡時(shí),試驗(yàn)組空腸和回腸絨毛高 度顯著高于對(duì)照組;在 75 齡時(shí),試驗(yàn)組回腸絨毛高度顯著高于 對(duì)照組;在 44 日齡時(shí),試驗(yàn)組回腸 V/C 顯著高于對(duì)照組。根據(jù) 本試驗(yàn)結(jié)果得出:試驗(yàn)組絨毛高度、隱窩深度和 V/C 略?xún)?yōu)于對(duì) 照組。 其原因可能是飼糧經(jīng)過(guò)益生菌發(fā)酵后,其營(yíng)養(yǎng)成分更有 益于動(dòng)物機(jī)體的吸收,幾種益生菌復(fù)合發(fā)酵后隨著飼糧一同進(jìn) 入消化道,黏附于腸道黏膜上皮細(xì)胞,并在動(dòng)物胃腸道中迅速 萌發(fā)和增殖,調(diào)節(jié)胃腸道微生物生態(tài)平衡,且發(fā)酵產(chǎn)物中的有 機(jī)酸、氨基酸和小肽等代謝產(chǎn)物能刺激腸絨毛的生長(zhǎng)發(fā)育和腸 上皮細(xì)胞的更新,增加絨毛高度,提高 V/C,進(jìn)而促進(jìn)小腸對(duì)飼 糧中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。此外,益生菌還能調(diào)節(jié)腸道黏液的 分泌,上調(diào)腸道上皮細(xì)胞緊密連接蛋白和細(xì)胞骨架蛋白的表達(dá), 增強(qiáng)腸上皮細(xì)胞間的緊密連接,維持腸道黏膜屏障的完整性。 小腸杯狀細(xì)胞起初分化于小腸腺,之后向絨毛頂端或腸上皮不 斷遷移分化,最后脫落至腸腔死亡,為杯狀細(xì)胞的一個(gè)分泌周期。 杯狀細(xì)胞是一種典型的黏液細(xì)胞,其成分主要是黏蛋白,黏蛋 白顆粒分泌到胞外與水、無(wú)機(jī)鹽等合成黏液附著在腸黏膜表面 形成腸道黏液層,有潤(rùn)滑保護(hù)作用,并參與多種腸道疾病的發(fā) 生發(fā)展。但腸絨毛杯狀細(xì)胞數(shù)量增多,分泌過(guò)量的黏液覆蓋在 腸黏膜表面,會(huì)使消化酶的分泌減少,腸黏膜的吸收面積減少, 再加之大量黏液被覆在腸上皮細(xì)胞的表面,在腸上皮細(xì)胞與腸 內(nèi)容物之間形成了一道屏障,減少了腸上皮細(xì)胞與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)接 觸的機(jī)會(huì),故在很大程度上降低了腸道的吸收面積,導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng) 物質(zhì)的吸收障礙,嚴(yán)重時(shí)可引起腹瀉。張獻(xiàn)彩發(fā)現(xiàn)發(fā)生糖尿病小鼠的小腸絨毛易被破壞,糖尿病組中杯狀細(xì)胞的分泌物比同 月份正常對(duì)照組顯著增加。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,在 44 日齡時(shí),對(duì) 照組十二指腸、空腸和回腸杯狀細(xì)胞數(shù)量極顯著高于試驗(yàn)組; 在 75日齡時(shí),對(duì)照組十二指腸杯狀細(xì)胞數(shù)量極顯著高于試驗(yàn)組。 分析原因可能是飼喂抗生素飼糧的對(duì)照組豬在斷奶后,由于受 到斷奶應(yīng)激的影響,腸道黏膜受損,破壞小腸絨毛,引起炎癥 反應(yīng),使緩激肽和組織胺釋放增多,這些刺激可直接引起杯狀 細(xì)胞分泌增多,而無(wú)抗發(fā)酵飼糧中的益生菌能與黏蛋白一起作 為腸道黏膜屏障,阻礙致病菌進(jìn)入體內(nèi),并能調(diào)節(jié)杯狀細(xì)胞的 產(chǎn)生和腸液中黏蛋白的含量,使腸道中杯狀細(xì)胞的數(shù)量趨于穩(wěn) 定,維持腸道結(jié)構(gòu)的完整。此外,發(fā)酵產(chǎn)物中的一些小分子有 益代謝產(chǎn)物能自由通過(guò)黏液層,更有利于機(jī)體的吸收。

4 結(jié) 論 

綜上所述,飼喂無(wú)抗發(fā)酵飼糧在哺乳、斷奶和保育階段對(duì) 豬機(jī)體無(wú)不良影響,并可在一定程度上改善腸道黏膜形態(tài),提 示無(wú)抗發(fā)酵飼糧可以替代含抗生素的飼糧應(yīng)用于豬生產(chǎn)中。 

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廣西助農(nóng)畜牧科技有限公司提供全方位支撐

2020年已全面禁抗,我們之前經(jīng)常在飼料中添加的抗生素進(jìn)行促生長(zhǎng)行為將是違法,否則面臨巨額罰單。如何既能夠促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)又能夠形成無(wú)抗養(yǎng)殖呢?其實(shí)中草藥在促進(jìn)畜禽養(yǎng)殖健康和生長(zhǎng)、改善肉蛋奶品質(zhì)大有可為,特別是將中草藥發(fā)酵后效果提升4-28倍等好處,這個(gè)實(shí)施方案比你想象中效果更好,運(yùn)用的沒(méi)有不被效果折服的,值得嘗試驗(yàn)證

我們的技術(shù)僅需在出欄前半個(gè)月左右運(yùn)用益生菌+酶制劑+中草藥相關(guān)的無(wú)違禁安全產(chǎn)品,肉質(zhì)改善非常顯著,且可以批量化生產(chǎn)。

目前我們已經(jīng)有了成熟的技術(shù)、產(chǎn)品和運(yùn)用方案,且有大量成功案例,可以在短時(shí)間、批量化、安全無(wú)違禁地為您的養(yǎng)殖場(chǎng)生產(chǎn)出高品質(zhì)的家畜、家禽、水產(chǎn)產(chǎn)品。

規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖公司我們提供產(chǎn)品樣品、驗(yàn)證效果和通過(guò)檢測(cè)后您再放心地規(guī)?;\(yùn)用。

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