復(fù)合菌劑對(duì)青貯玉米營(yíng)養(yǎng)成分及其飼喂灘羊效果的研究

2020-11-19 15:58:12 點(diǎn)擊：

摘要：篩選復(fù)配適合寧夏地區(qū)的青貯微生物菌劑，可解決在青貯自然發(fā)酵過(guò)程中，青貯玉米營(yíng)養(yǎng)損失多且易發(fā)霉等問(wèn)題。本研究對(duì)從寧夏中部干旱區(qū)自然發(fā)酵的青貯玉米飼料中分離鑒定的1株乳酸菌(Lactobacillus acidophilus)和1株酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)進(jìn)行性能測(cè)定，復(fù)配后形成復(fù)合菌劑并進(jìn)行45d的大型窖貯青貯發(fā)酵試驗(yàn)，設(shè)置不添加菌劑和添加商業(yè)菌劑的青貯飼料為對(duì)照組。營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定結(jié)果顯示，與不加菌劑和添加商業(yè)菌劑的對(duì)照組相比，經(jīng)復(fù)合菌劑處理后飼料中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維顯著下降(P<0.05)，干物質(zhì)和粗脂肪含量顯著增加(P<0.05)，粗蛋白含量變化不顯著。為期75d的灘羊肥育飼喂和5 d的消化代謝試驗(yàn)表明，對(duì)照組與試驗(yàn)組灘羊的日均采食量差異顯著儼(P<0.05)，平均日增重、末重、料重比差異不顯著。試驗(yàn)組灘羊?qū)η噘A玉米飼料中粗蛋白、粗脂肪表觀消化率顯著提高(P<0.05)，中性洗滌纖維表觀消化率提高，對(duì)酸性洗滌纖維的表觀消化率影響不顯著。結(jié)果表明，復(fù)合菌劑顯著改善了青貯玉米料的品質(zhì)，復(fù)合菌劑發(fā)酵的飼料玉米對(duì)灘羊生長(zhǎng)有良好的促進(jìn)作用。

玉米(Zea mays)是三大糧食作物之一，也是主要的飼料作物。用飼料玉米進(jìn)行青貯已成為反芻動(dòng)物飼料的主要加工方式。青貯飼料的制作表面簡(jiǎn)單，實(shí)則是一個(gè)極為復(fù)雜的微生物厭氧發(fā)酵過(guò)程。青貯飼料中的微生物主要有乳酸菌(Lactobacillus acidophilus)、酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)及其他腐敗細(xì)菌等。借助乳酸菌可以將青貯原料中的可溶性碳水化合物轉(zhuǎn)化為乳酸、乙酸等有機(jī)酸，降低pH，抑制有害微生物繁殖，最大限度地保持青貯原料的營(yíng)養(yǎng)成分，并延長(zhǎng)飼料的保存周期。

寧夏處于我國(guó)農(nóng)牧過(guò)渡區(qū)，尤其中部干旱地區(qū)是農(nóng)牧交錯(cuò)區(qū)，以灘羊?yàn)榇淼男竽翗I(yè)是其主要的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)。但飼喂灘羊的青貯玉米依然多采用自然發(fā)酵方式。研究表明，青貯原料上天然附著的乳酸菌數(shù)量較少，在青貯過(guò)程中產(chǎn)酸不足，不能迅速降低青貯體系的pH，抑制青貯飼料中其他微生物的繁殖能力較弱。青貯飼料中微生物大量繁殖，導(dǎo)致青貯飼料蛋白含量下降，降低青貯飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。青貯飼料制作過(guò)程中常出現(xiàn)發(fā)霉變質(zhì)現(xiàn)象，不僅造成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的嚴(yán)重?fù)p失和飼料原料浪費(fèi)，更嚴(yán)重的是霉變的青貯飼料會(huì)對(duì)動(dòng)物健康造成嚴(yán)重危害，處理不當(dāng)還會(huì)對(duì)當(dāng)?shù)丨h(huán)境造成嚴(yán)重污染。研究表明，通過(guò)人工添加乳酸菌增加青貯體系中乳酸菌數(shù)量，迅速產(chǎn)生大量的乳酸，加快發(fā)酵過(guò)程，可彌補(bǔ)自然發(fā)酵青貯飼料的不足，提高青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)。然而，目前市面上針對(duì)寧夏地區(qū)專用的青貯玉米菌劑種類較少，且現(xiàn)有商業(yè)青貯菌劑成分主要為單一產(chǎn)酸的乳酸菌菌株，其中的乳酸菌不能適應(yīng)寧夏地區(qū)特殊的氣候環(huán)境導(dǎo)致乳酸菌活性較低，從而導(dǎo)致商業(yè)青貯菌劑的青貯效果不佳。

本研究對(duì)從寧夏回族自治區(qū)自然發(fā)酵的青貯玉米飼料中通過(guò)有益菌群篩選、分離出的乳酸菌和酵母菌菌株進(jìn)行性能評(píng)估，復(fù)配形成適用于寧夏地區(qū)的復(fù)合青貯菌劑并接種于玉米飼料青貯，通過(guò)微生物的代謝活動(dòng)提高青貯玉米飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保存質(zhì)量，并通過(guò)灘羊飼喂和消化代謝試驗(yàn)，探究青貯玉米飼料的飼喂效果。這將對(duì)寧夏地區(qū)推廣使用優(yōu)化的青貯菌劑和灘羊養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展具有積極意義。

1 材料與方法

1.1 分離菌株的性能測(cè)定與復(fù)配

已分離鑒定的1株乳酸菌和1株酵母菌，來(lái)自本實(shí)驗(yàn)室從寧夏中部干旱區(qū)多個(gè)地點(diǎn)采集的玉米飼料自然發(fā)酵樣品，通過(guò)有益菌群培養(yǎng)、篩選獲得，本研究進(jìn)行菌株的性能測(cè)定。

乳酸菌產(chǎn)酸速率測(cè)定：取分離的乳酸菌于MRS培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng)24h進(jìn)行活化，之后以3％的接種量接入MRS液體培養(yǎng)基，37℃恒溫振蕩培養(yǎng)。從接種0h開始，每隔2h測(cè)定乳酸菌發(fā)酵液pH，連續(xù)測(cè)定30h。

菌株生長(zhǎng)性能測(cè)定：結(jié)合其產(chǎn)酸速率測(cè)定實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。從接種培養(yǎng)0h開始，每隔2h取樣，以MRS培養(yǎng)基為空白對(duì)照，600am波長(zhǎng)下測(cè)定樣品吸光值，連續(xù)測(cè)定30h。酵母菌首先在YPD液體培養(yǎng)基活化培養(yǎng)24h，之后以3％的接種量接入YPD液體培養(yǎng)基，28℃恒溫振蕩培養(yǎng)。從接種0h開始，每隔2h取一次樣，以YPD液體培養(yǎng)基為空白對(duì)照，660nm波長(zhǎng)下測(cè)定樣品吸光值，連續(xù)測(cè)定30h。

復(fù)合菌劑復(fù)配：分別取上述乳酸菌和酵母菌菌株，活化并培養(yǎng)后以1：1復(fù)配提供菌種，委托慕恩(北京)生物科技有限公司進(jìn)行生產(chǎn)性發(fā)酵。復(fù)合菌劑活菌總數(shù)≥1×1010CFU·g-1。青貯試驗(yàn)用的對(duì)比菌劑購(gòu)自山東鼎創(chuàng)生物科技有限公司的商業(yè)青貯菌劑，說(shuō)明書顯示其活菌總數(shù)≥1×1010CFU·g-1。

1.2 飼料玉米青貯試驗(yàn)

青貯用玉米原料產(chǎn)自寧夏回族自治區(qū)鹽池縣生長(zhǎng)到蠟熟期的全株青貯用玉米。隨機(jī)取樣后測(cè)定其營(yíng)養(yǎng)成分。青貯試驗(yàn)共分4組，青貯菌劑的添加量依據(jù)菌劑中活菌數(shù)確定。處理A為對(duì)照：不添加任何菌劑和添加劑，進(jìn)行自然發(fā)酵；處理B：添加2g·t-1商業(yè)菌劑發(fā)酵，活菌總數(shù)≥1×1010CFU·g-1；處理C：添加3g·t-1商業(yè)菌劑發(fā)酵，活菌總數(shù)≥1.5x1010CFU·g-1；處理D：添加2.5g·t-1復(fù)合菌劑發(fā)酵，活菌總數(shù)≥1×1010CFU·g-1。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，新鮮全株玉米收割后粉碎成5cm左右的秸稈，菌劑與蒸餾水混勻，噴霧器噴灑至原料，放入青貯窖壓實(shí)，塑料薄膜包覆，密封發(fā)酵45d。青貯窖的青貯容量在80t以上。

1.3 青貯后玉米飼料營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定

發(fā)酵45d后開窖，采用三點(diǎn)取樣法，取每個(gè)重復(fù)距表層40 cm的青貯玉米飼料混合。每個(gè)重復(fù)的取樣量為1kg，裝入無(wú)菌自封袋，低溫快速送至寧夏大學(xué)飼料工程技術(shù)研究中心進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定。測(cè)定指標(biāo)包括粗蛋白、粗脂肪、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、粗灰分和總氮。

1.4 灘羊飼喂試驗(yàn)

從鹽池縣種羊場(chǎng)選購(gòu)體重20kg左右的當(dāng)年3月齡斷奶灘羊羔羊14只，隨機(jī)分為兩組，每組7只。對(duì)照飼喂不添加菌劑的處理A自然發(fā)酵青貯玉米飼料，試驗(yàn)組飼喂添加復(fù)合菌劑的處理D青貯玉米飼料。在鮮重基礎(chǔ)上日糧組成為：青貯玉米飼料(50％)+羊草(20％)+精料補(bǔ)充料(30％)，日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

試驗(yàn)期共持續(xù)75d，其中預(yù)飼期15d，用于羊只適應(yīng)環(huán)境并確定飼喂量。所有試驗(yàn)羊單欄飼養(yǎng)，飼喂試驗(yàn)期間所有羊只自由采食、飲水。飼喂試驗(yàn)開始后，每天稱量每只灘羊的飼喂量和剩余量，計(jì)算當(dāng)日采食量；每隔20d進(jìn)行稱重一次。試驗(yàn)結(jié)束前，試驗(yàn)灘羊轉(zhuǎn)移至消化代謝籠，進(jìn)行為期5d的消化代謝試驗(yàn)，收集羊只的全部鮮糞稱重，測(cè)定粗蛋白、粗脂肪、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel初步整理后，采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行單因素方差分析和T檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析，P<0.05為差異顯著判定值。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株性能測(cè)定

乳酸菌產(chǎn)酸性能和乳酸菌、酵母菌生長(zhǎng)性能的測(cè)定結(jié)果見圖1。從圖1a可知，分離的乳酸菌產(chǎn)酸性能良好，從培養(yǎng)開始至12h內(nèi)可產(chǎn)生大量乳酸并在24h內(nèi)使培養(yǎng)液的pH從6.5迅速下降至4.0。從圖1b可知，乳酸菌培養(yǎng)8h可達(dá)到生長(zhǎng)峰值，酵母菌培養(yǎng)24～26h時(shí)達(dá)峰值。

2.2 發(fā)酵前后青貯飼料玉米的營(yíng)養(yǎng)成分

由表2可知，D組青貯飼料玉米的干物質(zhì)含量顯著高于A、B、C3組，B、C組在添加商業(yè)菌劑后干物質(zhì)含量較A組提高，但顯著低于D組。與對(duì)照A相比，添加商業(yè)菌劑的B、C組粗蛋白含量均顯著下降(P<0.05)，B、C組之間差異不顯著；添加復(fù)合菌劑的D組雖略有下降，但與對(duì)照組差異不顯著；但D組的粗蛋白含量顯著高于B、C組(P<0.05)。說(shuō)明復(fù)合菌劑抑制青貯飼料中蛋白質(zhì)分解的作用優(yōu)于商業(yè)菌劑組。

與對(duì)照A比較，添加復(fù)合菌劑發(fā)酵后最顯著的變化是酸性和中性洗滌纖維含量的降低。復(fù)合菌劑D組無(wú)論是酸性洗滌纖維還是中性洗滌纖維均顯著低于A、B、C組(P<0.05)，說(shuō)明復(fù)合菌劑降解青貯玉米飼料中纖維素、半纖維素的能力遠(yuǎn)大于商業(yè)菌劑。相反，D組的粗脂肪含量顯著高于A、B、C組(P<0.05)，表明經(jīng)復(fù)合菌劑發(fā)酵后能夠提高青貯玉米飼料的脂溶性物質(zhì)含量；商業(yè)菌劑的粗脂肪含量則隨活菌數(shù)增加有進(jìn)一步降低的可能。表中數(shù)據(jù)也表明，玉米飼料經(jīng)菌劑發(fā)酵后粗灰分和總氮含量均有降低，但復(fù)合菌劑D組的降低程度均低于商業(yè)菌劑B、C組，并且粗灰分與B、C組差異達(dá)顯著水平(P<0.05)。

綜合分析青貯后玉米飼料的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)結(jié)果，盡管復(fù)合菌劑D組的粗蛋白含量較A組略有下降，但在其他指標(biāo)上，尤其在提高粗脂肪、降鋸酸性和中性洗滌纖維含量方面均顯著優(yōu)于A、B、C組。

2.3 復(fù)合菌劑青貯玉米飼料對(duì)灘羊生長(zhǎng)性能的飼喂效果

與對(duì)照組相比，處理組灘羊的日均采食量顯著增加(P<0.01)。飼喂結(jié)束時(shí)的末體重、平均日增重和料重比雖然未達(dá)到顯著差異水平，但處理組末體重和平均日增重明顯較對(duì)照組提高，料重比下降。說(shuō)明復(fù)合菌劑改善了青貯玉米飼料的適口性，提高了灘羊的日均采食量，對(duì)飼料的利用率增加，進(jìn)而提高了灘羊的平均日增重，最終提高了飼料轉(zhuǎn)換效率(表3)。

2.4 復(fù)合茵劑青貯玉米飼料對(duì)灘羊的表觀消化率

與對(duì)照組相比，處理組灘羊極顯著地提高了對(duì)飼料中粗蛋白的表觀消化率(P<0.01)，對(duì)粗脂肪的表觀消化率也顯著提高(P<0.05)；對(duì)中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維的表觀消化率有提高趨勢(shì)，尤其是中性洗滌纖維接近了差異顯著水平(P=0.053)(表4)。

3 討論

乳酸菌的初始產(chǎn)酸量和菌群的生長(zhǎng)速度往往決定玉米青貯的質(zhì)量和成敗。良好的菌株必須達(dá)到以下基本條件：快速增殖，能與其他微生物區(qū)系競(jìng)爭(zhēng)而且成為優(yōu)勢(shì)菌種；能快速產(chǎn)生乳酸并盡快降低pH最終達(dá)到4.0;菌株本身耐酸等。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，我們分離出的乳酸菌菌株具有上述特性。目前市面上普遍使用的商業(yè)化菌劑中一般是植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)和戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)，兩者均屬于具有較強(qiáng)產(chǎn)酸能力的同型發(fā)酵乳酸菌，其進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)末期的時(shí)間均是12～13h。本研究分離的乳酸菌能在8h達(dá)到指數(shù)生長(zhǎng)的高峰，比一般菌劑提前4～5h，且能在12h內(nèi)產(chǎn)生大量的乳酸并在24h內(nèi)速降低培養(yǎng)液的pH到4.0，說(shuō)明該菌株是在長(zhǎng)期進(jìn)化和適應(yīng)當(dāng)?shù)貧夂颦h(huán)境中形成的優(yōu)勢(shì)菌株，具有迅速產(chǎn)生青貯發(fā)酵酸環(huán)境的良好功效。

粗蛋白含量是感官測(cè)定外衡量青貯飼料品質(zhì)的一個(gè)重要指標(biāo)。席興軍在青貯玉米飼料中添加乳酸菌后也觀測(cè)到粗蛋白含量從7.22％下降至6.74％，與本研究結(jié)果的趨勢(shì)一致。主要原因是由于在青貯發(fā)酵初期，青貯原料中存在多種厭氧、耐酸的梭菌，可以把青貯原料中的蛋白質(zhì)分解成氨氣和胺；同時(shí)，由于青貯原料刈割后植物呼吸作用和植物蛋白酶的作用，使青貯原料中的蛋白質(zhì)被分解為肽、游離氨基酸等，導(dǎo)致青貯飼料粗蛋白含量下降。本研究結(jié)果顯示，分離得到的乳酸菌能夠在接種后8 h迅速大量繁殖，在發(fā)酵初期就能有效降低植物呼吸作用和酶的活性，抑制有害附生微生物繁殖，減少了青貯早期的植物呼吸作用對(duì)糖的氧化和對(duì)蛋白質(zhì)的水解，從而抑制蛋白質(zhì)降解成非蛋白氮，較好地保持了青貯原料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，因而相較于商業(yè)菌劑的發(fā)酵青貯，復(fù)合菌劑發(fā)酵的玉米青貯粗蛋白含量下降較少。同時(shí)，復(fù)合菌劑中的酵母菌可以增加青貯飼料中微生物蛋白質(zhì)的含量，同時(shí)生成醇類等物質(zhì)，使青貯飼料具有特殊的香味，能夠提高青貯飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和適口性，進(jìn)而導(dǎo)致飼喂試驗(yàn)中日均采食量顯著增加。

中性洗滌纖維代表青貯飼料中的結(jié)構(gòu)性碳水化合物，與青貯飼料的適口性相關(guān)，青貯飼料的中性洗滌纖維含量越低，家畜的采食量越高；酸性洗滌纖維影響反芻動(dòng)物對(duì)青貯飼料的消化能力，青貯飼料中酸性洗滌纖維含量越低，青貯飼料的消化率越高。本研究顯示，添加復(fù)合菌劑后青貯玉米飼料的中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量均有較大程度下降，說(shuō)明乳酸菌和酵母菌在青貯發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的纖維素酶和脂酶等酶類起到了降解纖維素的作用，這與任付平的研究結(jié)果一致。

相關(guān)研究表明，青貯飼料中的粗脂肪含量相對(duì)較少，粗脂肪作為一種高能量物質(zhì)在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中發(fā)揮著重要作用。使用復(fù)合菌劑青貯后，青貯的粗脂肪含量顯著上升，高于對(duì)照組和商業(yè)菌劑組，說(shuō)明在復(fù)合菌劑及其分泌的酶類作用下產(chǎn)生了一些脂溶性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，致使青貯飼料具有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，這與李旭業(yè)等的研究結(jié)果一致。

飼喂和消化代謝試驗(yàn)結(jié)果顯示，在日糧代謝能和粗蛋白水平近似的情況下，飼喂添加復(fù)合菌劑的青貯玉米飼料，灘羊日均采食量、平均日增重和末體重均高于對(duì)照組，這也與Nkosi等、Basso等、Ando等報(bào)道的研究結(jié)果一致或相似，表明飼喂菌劑青貯飼料對(duì)灘羊生長(zhǎng)產(chǎn)生了促進(jìn)作用。除日均采食量的提高，青貯飼料持續(xù)保持的低pH環(huán)境也有助于降低乙酸、丁酸以及其他有害微生物的數(shù)量，提高干物質(zhì)回收率，提高了青貯飼料的利用率，從而提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能。同時(shí)，青貯玉米飼料中的乳酸菌、酵母菌等有益微生物作為益生菌進(jìn)入反芻動(dòng)物瘤胃后，在瘤胃中生長(zhǎng)繁殖，可以抑制胃腸道病原微生物的生長(zhǎng)，起到調(diào)節(jié)胃腸道菌群平衡的作用；也刺激消化道上皮組織，促進(jìn)了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。

日糧的營(yíng)養(yǎng)水平是影響反芻動(dòng)物消化代謝的直接因素。本研究證明，試驗(yàn)羊只對(duì)飼料粗蛋白、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維和粗脂肪的表觀消化率顯著增加，其他研究者也得到菌劑青貯飼料可以提高粗蛋白以及中性洗滌纖維例消化率的結(jié)果。玉米經(jīng)青貯復(fù)合菌劑青貯發(fā)酵后，飼料中的中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維顯著降低，致使相同配比日糧中菌劑青貯組的纖維含量明顯低于對(duì)照組。低纖維日糧增加青貯飼料、羊草等在瘤胃內(nèi)的滯留時(shí)間，降低飼料在胃腸道中的流通速度，從而提高了粗蛋白、粗脂肪以及鈣、磷等礦物質(zhì)在消化道中的表觀消化率。青貯飼料中的乳酸能在灘羊瘤胃內(nèi)被瘤胃微生物有效利用，促進(jìn)了瘤胃微生物的繁殖，進(jìn)而促進(jìn)了瘤胃微生物將青貯飼料中的氮轉(zhuǎn)化為微生物蛋白氮的生化反應(yīng)，提高了粗蛋白的消化利用率。同時(shí)，酵母菌和乳酸菌在增殖中產(chǎn)生的大量消化酶類，進(jìn)一步加快了中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維在瘤胃內(nèi)的降解，提高了灘羊?qū)η噘A飼料營(yíng)養(yǎng)成分的利用率。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，復(fù)合菌劑接種后8h可迅速大量繁殖、24h時(shí)pH達(dá)到并穩(wěn)定在4.0，可以顯著降解玉米飼料的中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維，提高干物質(zhì)和粗脂肪含量，延緩粗蛋白的分解。使用復(fù)合菌劑發(fā)酵的玉米青貯飼喂灘羊，可顯著增加灘羊的日均采食量，提高粗蛋白、粗脂肪和中性洗滌纖維的表觀消化率，進(jìn)而提高灘羊生長(zhǎng)性能。

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