酒糟原料能夠當(dāng)作飼料來用，但如果直接飼喂動(dòng)物可能會(huì)造成它們出現(xiàn)營養(yǎng)不良、消化不良等情況，嚴(yán)重還可能會(huì)導(dǎo)致它們出現(xiàn)酒精中毒。而通過酒糟發(fā)酵，就能夠借助益生菌的代謝過程對(duì)酒糟內(nèi)的有害物質(zhì)吸收和分解，從而達(dá)到無毒化處理的效果。將酒糟當(dāng)作下腳料，具有價(jià)格低廉的特點(diǎn)，能夠有效當(dāng)作養(yǎng)殖行業(yè)補(bǔ)充的原料，具有很好的使用效果和經(jīng)濟(jì)效益，而這也推動(dòng)了酒糟發(fā)酵飼料的發(fā)展。

一、試驗(yàn)材料和方法

1、試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料主要包括菌種和培養(yǎng)基。其中菌種主要包括產(chǎn)出甘露聚糖酶的枯草L1芽孢桿菌、產(chǎn)出木聚糖酶的枯草L2芽孢桿菌、產(chǎn)出植酸酶的枯草L3芽孢桿菌，它們都是通過實(shí)驗(yàn)室從酒糟中篩選的原始菌株，提供酒糟的來源是河套酒業(yè)酒廠。在培養(yǎng)基中，一種是枯草的芽孢桿菌其種子的培養(yǎng)基，含有1%蛋白胨、1%牛肉膏、0.5%氯化鈉成分，在121℃進(jìn)行20min滅菌處理;還有一種是固態(tài)發(fā)酵的培養(yǎng)基，含有35%白酒酒糟、65%玉米粉和豆粕粉成分，且玉米粉以及豆粕粉是按照7:3的比例配置的，通過121℃環(huán)境條件進(jìn)行 30min 的滅菌處理。提供酒糟的來源是河套酒業(yè)酒廠，而玉米粉以及豆粕粉則是在市場進(jìn)行購買。

2、試驗(yàn)方法

2.1 菌種液培養(yǎng)法

在試驗(yàn)開展中，先針對(duì)3株枯草的芽孢桿菌基于斜面對(duì)它們的2環(huán)部位實(shí)施挑取處理，后將它們分放置到種子的培養(yǎng)基內(nèi)開展接種。其中對(duì)L1與L2培養(yǎng)中，主要設(shè)置的環(huán)境條件是30℃，并通過180r/min的速度對(duì)其實(shí)施12h的搖瓶處理，而在對(duì)L3培養(yǎng)中，主要設(shè)置的環(huán)境條件是37℃，并通過180r/min的速度對(duì)其實(shí)施10h的搖瓶處理。

2.2 制備粗酶液的方法

在完成發(fā)酵后，進(jìn)行50mL量蒸餾水的添加，以4200r/min的速度進(jìn)行15min的離心處理，此時(shí)粗酶液就是所取的上清液。

2.3 對(duì)酶活性的檢測法

對(duì)甘露聚糖酶的活力測定中，采用DNS法。對(duì)甘露聚糖酶的活力單位相關(guān)定義分析，主要指樣品處于37℃與pH7條件下，在每分鐘時(shí)間內(nèi)會(huì)從0.5%質(zhì)量分?jǐn)?shù)甘露聚糖的溶液內(nèi)共釋放出相當(dāng)1μumol量D－甘露糖的還原糖實(shí)際所需的酶量值，也就是一酶活力的單位，通過U/g進(jìn)行表示。

對(duì)木聚糖酶的活力測定中，采用DNS法。對(duì)木聚糖酶的活性單位相關(guān)定義實(shí)施分析，其主要是指樣品放置在40℃環(huán)境以及pH6的條件狀態(tài)下，其在每分鐘時(shí)間內(nèi)會(huì)從0.5%質(zhì)量分?jǐn)?shù)木聚糖的溶液內(nèi)釋放出1μmol的木糖，也就是一酶活力的單位，通過U/g進(jìn)行表示。

對(duì)植酸酶的活力測定中，采用鉬黃法來完成。對(duì)窮植酸酶的活性單位相關(guān)定義實(shí)施分析，主要是指樣品放置在37℃環(huán)境以及pH5.5的條件狀態(tài)下，樣品在每分鐘時(shí)間內(nèi)從5mmol/L濃度植酸鈉的溶液內(nèi)所釋放出1μmol的無機(jī)磷，也就是一酶活力的單位，通過U/g進(jìn)行表示。

對(duì)組分的變化量進(jìn)行測定中，其中對(duì)甘露聚糖的變化量進(jìn)行測定采用DNS法;對(duì)木聚糖的變化量進(jìn)行測定采用地衣酚和鹽酸的顯色劑、雙波長的差值法;對(duì)植酸的變化量進(jìn)行測定中，采用TCA法;對(duì)粗蛋白的測定采用凱氏的定氮法等。

二、試驗(yàn)結(jié)果和分析

1 對(duì)產(chǎn)酶條件的優(yōu)化。

1.1 對(duì)玉米與豆粕的配比優(yōu)化

在33℃溫度，初始的料水比是1∶1.2，進(jìn)行接種的量是1mL，且3株菌的接種比例是1∶1∶1，在自然pH和5d發(fā)酵時(shí)間下，保持其它的條件不變，對(duì)玉米粉以及豆粕粉在8∶2、7∶3、6∶4、5∶5的不同比例下會(huì)對(duì)產(chǎn)酶存在的影響進(jìn)行研究。

在玉米粉以及豆粕粉發(fā)酵期間，它們分別具有碳源、氮源作用，則二者比例會(huì)對(duì)發(fā)酵的過程產(chǎn)生直接的影響。通過研究得知，玉米粉以及豆粕粉在7∶3比例時(shí)，L1與L2具有最好的產(chǎn)酶效果，玉米粉以及豆粕粉是6∶4比例時(shí)，L3具有最好的產(chǎn)酶條件。對(duì)3株菌具體產(chǎn)酶的效果綜合考慮，就對(duì)玉米粉以及豆粕粉選擇7∶3的配比實(shí)施試驗(yàn)開展。

2 對(duì)酒糟比例的優(yōu)化

對(duì)酒糟實(shí)施調(diào)節(jié)，對(duì)其設(shè)置出35%、37%、39%、41%的比例，來進(jìn)行酒糟比例會(huì)對(duì)產(chǎn)酶影響的研究。選擇玉米粉以及豆粕粉是7∶3的比例。

盡管酒糟具有豐富的營養(yǎng)，但具有較高的含酸量，且在酒精進(jìn)行發(fā)酵的動(dòng)態(tài)化期間，還會(huì)存在大量副產(chǎn)物的出現(xiàn)，而酒糟含量是會(huì)對(duì)發(fā)酵的動(dòng)態(tài)過程產(chǎn)生影響。通過研究得知，當(dāng)酒糟含量處在35%～41%范圍，在酒糟的含量逐漸增加時(shí)，L1與L3具有產(chǎn)酶的效果就逐漸發(fā)生下降，但L2實(shí)際產(chǎn)酶的效果則逐漸發(fā)生提升。因?yàn)長3產(chǎn)酶的效果處于37%與39%的時(shí)候，具有較大的差別，則選酒糟其最佳含量是37%條件下，實(shí)施下一步的試驗(yàn)活動(dòng)開展。

3、對(duì)麩皮比例的優(yōu)化

在對(duì)麩皮添加中，來對(duì)麩皮比例實(shí)施調(diào)節(jié)，主要選取比例為0、10%、20%、30%，進(jìn)而按照其比例的不同來分析可能會(huì)對(duì)產(chǎn)酶量產(chǎn)生的影響程度。此時(shí)試驗(yàn)中，酒糟選擇37%的比例狀態(tài)，而其它的條件則和上一步開展的試驗(yàn)具有相同條件狀態(tài)。當(dāng)麩皮處于固態(tài)的培養(yǎng)基內(nèi)，它具有增加培養(yǎng)基空隙的效果，促進(jìn)空氣具備更好的流通性，且麩皮內(nèi)是具備木糖含量的，而此物質(zhì)會(huì)對(duì)菌體內(nèi)木聚糖酶產(chǎn)生分泌的誘導(dǎo)效應(yīng)。通過研究得知，在麩皮的添加比例逐漸增大時(shí)，L2的產(chǎn)酶效果呈現(xiàn)出上升的狀態(tài)，但對(duì)L1與L3的影響并不是很大，則對(duì)麩皮添加就選擇用30%的比例。

4、對(duì)接種條件的優(yōu)化

對(duì)L1、L2 以及 L3 接種的比例進(jìn)行調(diào)節(jié)，分別是4∶3∶3、2∶2∶1、2∶1∶2、2∶1∶1、5∶3∶2、5∶2∶3，來研究接種的不同比例會(huì)對(duì)產(chǎn)酶造成的影響;后基于2∶1∶2、5∶3∶2比例，對(duì) L3 進(jìn)行 12h 與和 24h 的提前接種，基于2∶1∶2、5∶2∶3比例，對(duì) L2 進(jìn)行 12h 與和 24h 的提前接種，來研究接種的順序會(huì)對(duì)產(chǎn)酶造成的影響;最后對(duì)接種量調(diào)節(jié)，分別調(diào)節(jié)成0.8、1.0、1.2、1.4mL，來進(jìn)行接種量會(huì)對(duì)產(chǎn)酶造成的影響研究。此時(shí)麩皮是30%的比例，其它的條件和上一步的試驗(yàn)條件保持一致。接種量對(duì)發(fā)酵的周期以及產(chǎn)酶的效果產(chǎn)生直接影響，若接種量太低，會(huì)導(dǎo)致菌體的生長出現(xiàn)遲緩，而接種量太大，會(huì)造成菌體的繁殖過快。對(duì)接種比例的試驗(yàn)以及接種的順序試驗(yàn)實(shí)施結(jié)合研究，對(duì)接種選擇2∶2∶1比例，對(duì)L3進(jìn)行12h的提前接種，此時(shí)3株菌具有較好的產(chǎn)酶效果;在接種量是1.0mL，則3株菌的產(chǎn)酶效果最佳。

5、對(duì)發(fā)酵溫度的優(yōu)化

分別選擇30℃、32℃、34℃和36℃的溫度條件實(shí)施發(fā)酵處理，來進(jìn)行發(fā)酵的溫度會(huì)對(duì)產(chǎn)酶造成影響進(jìn)行研究。在接種中，對(duì)L1∶L2∶L3比例選擇2∶2∶1，且對(duì)L3提前12h進(jìn)行接種，選擇1.0mL的接種量，而其它條件和上一步的試驗(yàn)條件保持一致。通過研究得知，在溫度不斷升高時(shí)，L3的產(chǎn)酶效果發(fā)生了提升，但L1與L2最佳的產(chǎn)酶溫度則分是34℃、32℃。因?yàn)長2于32℃與34℃產(chǎn)酶的效果存在產(chǎn)別的不顯著，則選最佳的溫度是34℃。

6、對(duì)pH的優(yōu)化

將初始的pH調(diào)節(jié)成7、7.5、8、8.5、9，來進(jìn)行初始pH會(huì)對(duì)產(chǎn)酶造成影響進(jìn)行研究。對(duì)溫度控制34℃，其它的條件和上一步的試驗(yàn)條件保持一致。通過研究得知，pH的變化對(duì)這3株菌的產(chǎn)酶效果存在不顯著的影響，而對(duì)L2與L3在pH是8時(shí)，具有較好的效果，但是不明顯的，就選pH是8實(shí)施下一步的試驗(yàn)開展。

7、對(duì)料水比的優(yōu)化

對(duì)初始的料水比調(diào)節(jié)成1∶0.8、1∶1.0、1∶1.2、1∶1.4，來進(jìn)行初始的料水比會(huì)對(duì)產(chǎn)酶造成的影響研究。此事選pH是8，其它的條件和上一步的試驗(yàn)保持一致。通過研究得知，L1與L2在初始的料水比是1∶1，具有最好的產(chǎn)酶效果，而L3在1∶1.2效果最好，但其在1∶1與1∶1.2存在差別不大，則選最佳初始的料水比是1∶1。

8、對(duì)發(fā)酵時(shí)間的優(yōu)化

對(duì)發(fā)酵的時(shí)間控制在2d、3d、4d、5d、6d。通過研究得知，隨培養(yǎng)的時(shí)間增加，這3株菌具有產(chǎn)酶的效果呈現(xiàn)先增后降的狀態(tài)，在培養(yǎng)的時(shí)間達(dá)到5d，此3株菌具有產(chǎn)酶的效果是最佳的，則選培養(yǎng)的時(shí)間是5d。

9、對(duì)飼料指標(biāo)的測定

完成優(yōu)化試驗(yàn)后，對(duì)木聚糖、植酸和甘露聚糖分別實(shí)施測定，得到它們成分底物實(shí)際變化量，如表1所示。