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導(dǎo)讀

我國(guó)因?yàn)E用抗生素、激素和違禁藥品飼喂畜禽，食品安全事件頻發(fā)，引起了政府和廣大消費(fèi)者的高度關(guān)注。新型、綠色、無(wú)公害生物飼料可以有效解決飼料安全帶來(lái)的肉食品安全問(wèn)題，已經(jīng)成為行業(yè)專(zhuān)家的研究熱點(diǎn)。

生物飼料的一個(gè)重要研究方向是微生物固態(tài)發(fā)酵飼料。當(dāng)前各種發(fā)酵型雜粕等蛋白飼料原料在生豬養(yǎng)殖上的應(yīng)用試驗(yàn)研究較多，而微生物發(fā)酵全價(jià)飼料，特別是微生物發(fā)酵無(wú)抗生素的全價(jià)飼料在生豬生長(zhǎng)全階段（20～120kg）飼喂使用的報(bào)道則較少見(jiàn)，因此，本試驗(yàn)在４個(gè)不同處理的復(fù)合益生菌發(fā)酵不含抗生素全價(jià)飼料對(duì)仔豬進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，挑選對(duì)照組和最佳劑量發(fā)酵飼料添加組（20%），進(jìn)一步研究復(fù)合益生菌發(fā)酵無(wú)抗飼料與含抗生素日糧對(duì)比對(duì)生長(zhǎng)肥育豬（20～110kg）全階段生產(chǎn)性能、血液生化指標(biāo)、免疫性能以及肉品質(zhì)的影響，旨在為研發(fā)綠色安全環(huán)保型無(wú)抗發(fā)酵飼料并規(guī)?；瘧?yīng)用提供理論和技術(shù)支持。

1材料和方法

1.1復(fù)合益生菌制劑和無(wú)抗發(fā)酵全價(jià)配合飼料

本試驗(yàn)中的復(fù)合微生態(tài)益生菌制劑由湖南省微生物研究院動(dòng)物微生物研究室提供，活菌數(shù)為≥2×109 cfu／mL。復(fù)合益生菌制劑主要成分為枯草芽胞桿菌、乳酸桿菌和釀酒酵母菌等。發(fā)酵的底物為生長(zhǎng)育肥豬全價(jià)配合粉料，發(fā)酵時(shí)發(fā)酵液接種比例5％，添加水分質(zhì)量比35％，飼料和液體質(zhì)量比為6∶4。發(fā)酵飼料發(fā)酵3ｄ以上可以使用，保質(zhì)期在密封條件下為1個(gè)月左右。發(fā)酵時(shí)間少于3ｄ飼料發(fā)酵程度不夠，發(fā)酵時(shí)間過(guò)長(zhǎng)容易造成飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗，一般在保質(zhì)期1個(gè)月內(nèi)使用完畢效果最佳。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物和分組

將60頭18ｋｇ左右的杜洛克×長(zhǎng)白×大白雜交保育仔豬按照體質(zhì)量大小和公母大致各半的原則完全隨機(jī)分作２個(gè)處理，每處理設(shè)３個(gè)重復(fù)，每重復(fù)的單欄內(nèi)放入10頭仔豬。以豬場(chǎng)使用的常規(guī)含抗生素日糧為基礎(chǔ)對(duì)照日糧，作為對(duì)照組Ａ；以質(zhì)量百分比80％不含抗生素的基礎(chǔ)對(duì)照日糧和２０％的無(wú)抗發(fā)酵全價(jià)飼料組成試驗(yàn)組日糧，設(shè)定為試驗(yàn)組Ｂ。２個(gè)處理組分別飼喂相對(duì)應(yīng)日糧。試驗(yàn)于2013年在湖南永州某公司豬場(chǎng)進(jìn)行。

１.３試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧

為了試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，兼顧生長(zhǎng)豬和育肥豬兩階段的營(yíng)養(yǎng)需要，整個(gè)試驗(yàn)期使用相同日糧配方，其配方組成及營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)見(jiàn)表１。

其中對(duì)照組預(yù)混料為每千克全價(jià)料提供Cu40ｍｇ；Fe100ｍｇ；Zn 80mg；Mn 40ｍｇ；I１mg；Se0.3ｍｇ；VA9000IU；VD31200IU；VE80IU；VK4ｍｇ；VB36mg；VB320mg；煙酸20mg；泛酸15mg；生物素0.3mg；膽堿300mg；含抗生素黃霉素10mg。試驗(yàn)組預(yù)混料在對(duì)照組預(yù)混料基礎(chǔ)上去除抗生素，其余完全一致。

無(wú)抗飼料發(fā)酵前和發(fā)酵7ｄ后成分檢測(cè)結(jié)果：發(fā)酵前飼料營(yíng)養(yǎng)成分檢測(cè)值為粗蛋白16.6％，鈣0.58％，總磷0.49％，無(wú)機(jī)磷0.30％；發(fā)酵7ｄ后飼料營(yíng)養(yǎng)成分檢測(cè)值為粗蛋白16.7％，鈣0.58％，總磷0.50％，無(wú)機(jī)磷0.36％，乳酸菌3.0×109 cfu／ｇ，枯草芽孢桿菌4.8×109 cfu／ｇ，酵母菌5.0×107cfu／ｇ。發(fā)酵前飼料中賴(lài)氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸和色氨酸檢測(cè)值分別為0.811％、0.264％、0.632％、0.798％；發(fā)酵７ｄ后飼料中賴(lài)氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸和色氨酸檢測(cè)值分別為0.836％、0.271％、0.629％、0.195％。

1.4飼養(yǎng)管理

按豬場(chǎng)常規(guī)飼養(yǎng)管理程序進(jìn)行。預(yù)試期3d，正試期后各組分別使用相應(yīng)日糧飼喂。自由飲水采食，免疫按豬場(chǎng)正常程序。試驗(yàn)期154ｄ。

1.5測(cè)定指標(biāo)

１）生產(chǎn)性能指標(biāo)測(cè)定。①平均日增重：對(duì)各欄試驗(yàn)豬于試驗(yàn)開(kāi)始當(dāng)天和試驗(yàn)結(jié)束最后一天早上08：00空腹稱(chēng)質(zhì)量，根據(jù)初質(zhì)量和末質(zhì)量以及試驗(yàn)天數(shù)計(jì)算平均日增重。②平均采食量：記錄各組每周的采食量（試驗(yàn)組按照飼喂基礎(chǔ)量的0.92倍系數(shù)換算成與對(duì)照組同樣的風(fēng)干型日糧質(zhì)量），試驗(yàn)結(jié)束后結(jié)算各組消耗飼料，計(jì)算出平均日采食量。③料重比：根據(jù)日增重和采食量計(jì)算。

２）血液生化和免疫指標(biāo)測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天早晨從各組隨機(jī)抽出3頭接近中等體質(zhì)量空腹肉豬，經(jīng)耳靜脈采血各5mL，全血置于采血管中15～30°角度斜面靜置自然析出血清，3000ｒ／min離心15min，用無(wú)菌注射器取上部透明血清于離心管中，記號(hào)筆標(biāo)寫(xiě)清楚。將各血清樣品分成3～4份到1ｍＬ塑料離心管并放入移動(dòng)式低溫保藏箱，迅速送到市人民醫(yī)院檢測(cè)，采用日立7020全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定以下指標(biāo)：血清堿性磷酸酶、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、血清尿素氮、血清葡萄糖、血清總蛋白，血清白蛋白、血清球蛋白。血清免疫球蛋白（IgA、IgG 和IgM）采用免疫透射比濁法測(cè)定。

３）肉質(zhì)指標(biāo)測(cè)定。每個(gè)處理組選?。愁^接近平均體質(zhì)量的豬屠宰，宰后0.5～2.0ｈ內(nèi)，取胸腰椎結(jié)合處至第2腰椎處背最長(zhǎng)肌進(jìn)行pH、肉色的測(cè)定；取第2～5腰椎處背最長(zhǎng)?。ū渲斜４妫┯糜诘嗡畵p失、嫩度和肌內(nèi)脂肪測(cè)定。

分別在屠宰后的45min和2ｈ測(cè)定肌肉pH，將肉食品專(zhuān)用pH 計(jì)（德國(guó)德圖儀器公司Testo－205）探針插入取樣豬肉表面向內(nèi)約2.5cm深處，讀取數(shù)據(jù)。

肉色測(cè)定采用CIELAB系統(tǒng)，用SC－8C型全自動(dòng)色差計(jì)（北京康光儀器有限公司，北京），屠宰后立即測(cè)定采樣豬肉的L* 值、a* 值和b*  值。L* 、a*  和b*  分別表示亮度、紅度和黃度，值越大表示對(duì)應(yīng)的顏色越深。

肌肉嫩度測(cè)定：將屠宰后取樣豬肉用塑料袋密封，肉樣中間插入溫度計(jì)，在80 ℃ 水中煮約10min，等溫度計(jì)顯示溫度達(dá)到75℃，取出樣品，查明肌纖維走向，沿肌纖維走向修剪成截面1.27cm×1.27cm左右的肉條。上機(jī)測(cè)定時(shí)，肌纖維走向與刀口垂直。采用C-LM3型數(shù)字嫩度計(jì)測(cè)定肌肉嫩度（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，哈爾濱），測(cè)試刀頭行走速度200ｍｍ／min，記錄單位為牛，N。

背最長(zhǎng)肌的肌內(nèi)脂肪測(cè)定采用有機(jī)溶劑正己烷進(jìn)行索氏脂肪抽提，以脂肪含量占肌肉組織鮮質(zhì)量的百分比表示測(cè)定結(jié)果。

1.6數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SAS軟件進(jìn)行ｔ檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05作為數(shù)據(jù)結(jié)果差異是否顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2結(jié)果與分析

2.1無(wú)抗發(fā)酵飼料對(duì)生長(zhǎng)育肥豬生產(chǎn)性能的影響

在試驗(yàn)期內(nèi)，對(duì)照飼喂含有抗生素的基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組飼喂含20％無(wú)抗發(fā)酵飼料的日糧，2個(gè)處理組對(duì)生長(zhǎng)育肥豬生產(chǎn)性能的影響見(jiàn)表2。

從表2可知：20％無(wú)抗發(fā)酵飼料添加試驗(yàn)處理組的結(jié)束平均頭質(zhì)量、平均日增重和平均日采食量都顯著高于對(duì)照組，而試驗(yàn)組的耗料增重比則顯著低于對(duì)照組。與對(duì)照組比較，試驗(yàn)組平均日增重提高10.89％，平均日采食量提高5.86％，耗料增重比降低4.38％。

2.2無(wú)抗發(fā)酵飼料對(duì)生長(zhǎng)肥育豬血液生化指標(biāo)和免疫指標(biāo)的影響

無(wú)抗發(fā)酵飼料對(duì)生長(zhǎng)肥育豬血液生化指標(biāo)和免疫指標(biāo)的影響見(jiàn)表3。

由表3可見(jiàn)：試驗(yàn)組（無(wú)抗飼料添加組）的血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素、白蛋白和白球比例都顯著低于對(duì)照組；而試驗(yàn)組的血清堿性磷酸酶、葡萄糖、球蛋白和IgG則顯著高于對(duì)照組。2個(gè)處理組間血清總蛋白、IgM 和IgA檢測(cè)數(shù)值差異不顯著。

2.3無(wú)抗發(fā)酵飼料對(duì)生長(zhǎng)肥育豬肉品質(zhì)的影響

無(wú)抗發(fā)酵飼料對(duì)生長(zhǎng)肥育豬肉品質(zhì)的影響見(jiàn)表4。由表4可見(jiàn)，2個(gè)處理組之間屠宰豬肉的亮度值（L*）和黃度值（b* ）差異不顯著。試驗(yàn)處理組屠宰豬肉的45minpH、2hpH、紅度值（a*）和肌內(nèi)脂肪顯著高于對(duì)照組，與對(duì)照組比較分別提高3.09％、2.11％、8.06％和28.06％；試驗(yàn)處理組屠宰豬肉的滴水損失和剪切力顯著低于對(duì)照組，與對(duì)照組比較分別降低36.24％和29.41％。

3討  論

3.1無(wú)抗發(fā)酵飼料對(duì)生長(zhǎng)育肥豬生產(chǎn)性能的影響

本試驗(yàn)中發(fā)酵無(wú)抗飼料采用的復(fù)合微生態(tài)制劑是由乳酸菌、枯草芽胞桿菌和釀酒酵母菌按照1∶1∶1比例組成的。生產(chǎn)的發(fā)酵飼料中除了含有活的益生菌，還有其代謝過(guò)程產(chǎn)生的淀粉酶、蛋白酶和纖維素酶等消化酶。飼料的發(fā)酵過(guò)程可以將飼料蛋白部分分解為小肽和游離氨基酸，可以賦予發(fā)酵飼料酸香味，改善適口性，促進(jìn)采食，提高飼料的消化率和增加動(dòng)物對(duì)飼料的消化能力，提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能。在本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組添加20％無(wú)抗發(fā)酵飼料明顯比對(duì)照組的平均日增重、平均日采食量、耗料增重比都要好。這個(gè)結(jié)果與前人的研究報(bào)道基本一致。比如劉瑞麗等研究發(fā)現(xiàn)飼料經(jīng)復(fù)合益生菌（主要成分為：芽胞桿菌、乳酸桿菌、酵母菌等）發(fā)酵后，品質(zhì)得到改善，其最佳發(fā)酵時(shí)間為6ｄ，具有改善肥育豬生產(chǎn)性能的效果，與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致。眾多研究者發(fā)現(xiàn)發(fā)酵飼料在生長(zhǎng)肥育豬上使用都可以取得較好的經(jīng)濟(jì)效益。張?jiān)朴暗韧ㄟ^(guò)在育肥豬日糧中添加20％袋裝厭氧固態(tài)發(fā)酵飼料，發(fā)現(xiàn)對(duì)降低藥費(fèi)開(kāi)支、提高豬群采食量、提高育肥豬日增重均有良好效果，試驗(yàn)組平均盈余比對(duì)照組多出31.36元／頭。發(fā)酵飼料在肥育豬飼糧中等量代替5％的豆粕，能顯著提高肥育豬增重，降低料重比，飼料成本下降，經(jīng)濟(jì)效益提高。黃印堯等應(yīng)用酒糟益生菌發(fā)酵飼料喂豬，結(jié)果表明每頭出欄肥豬可以降低飼料成本達(dá)60元。曹啟民等在基礎(chǔ)飼料中添加20％的自制靈芝菌糠發(fā)酵飼料對(duì)豬的生長(zhǎng)性能未產(chǎn)生顯著影響，但是可降低每千克增重飼料成本約5.19％。肖軻等飼喂低劑量發(fā)酵飼料組（添加量為7.5％，菌種組合為乳酸菌、釀酒酵母和芽孢菌）平均日增重高于對(duì)照組和高劑量發(fā)酵飼料添加組（添加量為15％），而高劑量發(fā)酵飼料添加組優(yōu)于對(duì)照組。在發(fā)酵飼料的添加劑量上大家的研究結(jié)果不盡相同，可能和各個(gè)試驗(yàn)具體使用的益生菌菌群組合、發(fā)酵飼料中是否添加抗生素、全價(jià)料的配方組成以及試驗(yàn)豬只品種等因素的差異性有關(guān)。

3.2無(wú)抗發(fā)酵飼料對(duì)生豬育肥豬血液生化指標(biāo)和免疫功能指標(biāo)的影響

機(jī)體新陳代謝產(chǎn)生的變化可以通過(guò)血液生化指標(biāo)的變化表現(xiàn)出來(lái)。血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶是肝臟和心臟器官功能反映的重要指標(biāo)，如果其指標(biāo)水平過(guò)高，說(shuō)明相應(yīng)的器官可能受到一定損傷。

血清堿性磷酸酶活性和機(jī)體生長(zhǎng)緊密相關(guān)，堿性磷酸酶水平的升高就表示成骨細(xì)胞活性提高，骨質(zhì)生成旺盛，骨中鈣、磷的沉積增加。唐曉玲等認(rèn)為血清中堿性磷酸酶檢測(cè)水平的高低與動(dòng)物的生長(zhǎng)速度密切相關(guān)。本試驗(yàn)中20％無(wú)抗發(fā)酵飼料添加組肉豬的堿性磷酸酶活性顯著高于含抗生素日糧的對(duì)照組，進(jìn)一步確證了益生菌發(fā)酵飼料能夠提高肉豬生長(zhǎng)性能。

動(dòng)物體內(nèi)的蛋白質(zhì)代謝和氨基酸之間的平衡狀況可以通過(guò)血清尿素氮含量準(zhǔn)確反映出來(lái)，氨基酸平衡較好時(shí)則血清尿素氮含量下降。血清尿素氮含量容易受到飼料中蛋白質(zhì)、氨基酸含量與質(zhì)量等因素的影響，其濃度與體內(nèi)氮沉積率、蛋白質(zhì)或氨基酸利用率呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。

本試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果表明，無(wú)抗發(fā)酵飼料組的血清尿素氮含量明顯低于對(duì)照組，表明益生菌發(fā)酵飼料可提高動(dòng)物機(jī)體氮沉積，增加蛋白質(zhì)合成，提高生長(zhǎng)速度。2種飼料血清尿素氮差異可能與飼料中氨基酸組成和平衡有關(guān)。本試驗(yàn)中通過(guò)益生菌發(fā)酵后飼料中賴(lài)氨酸含量有明顯增加，其他氨基酸檢測(cè)數(shù)值變化不大。本試驗(yàn)無(wú)抗發(fā)酵飼料對(duì)生長(zhǎng)育肥豬血液各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果與以前研究結(jié)果基本一致。血清中總蛋白濃度反映了機(jī)體對(duì)蛋白的吸收情況和體液免疫的關(guān)系。白蛋白對(duì)肝臟在蛋白代謝中起著重要作用。血清球蛋白是機(jī)體免疫器官制造的，對(duì)機(jī)體免疫力具有重要作用，免疫水平的高低間接反映了機(jī)體對(duì)疾病的抵抗能力。本試驗(yàn)結(jié)果顯示無(wú)抗發(fā)酵飼料與有抗生素的對(duì)照組比較，對(duì)育肥豬的血清中總蛋白、IgM 和IgA無(wú)差異顯著性影響，但是顯著提高血清中球蛋白和IgG水平；表明生長(zhǎng)育肥豬日糧中添加微生物發(fā)酵飼料有助于提高其機(jī)體的免疫能力，與眾多研究結(jié)果基本一致。但是肖軻等飼喂肥豬低劑量發(fā)酵飼料組（添加量為7.5％，菌種組合為乳酸菌、釀酒酵母和芽胞菌）血清中白蛋白含量、尿素氮含量均高于對(duì)照組和高劑量發(fā)酵飼料添加組（添加量為15％），部分血液生化指標(biāo)變化規(guī)律與本試驗(yàn)不一致。

益生菌發(fā)酵飼料能夠提高動(dòng)物的免疫力，其作用機(jī)理可能有以下五方面原因：

（１）腸道中的優(yōu)勢(shì)益生菌群可以促進(jìn)機(jī)體免疫器官發(fā)育和成熟，提高Ｔ、Ｂ淋巴細(xì)胞的數(shù)量，啟動(dòng)免疫應(yīng)答；

（２）有益菌在腸道粘膜定植能激活腸道粘膜的免疫功能，誘導(dǎo)淋巴組織漿細(xì)胞生成分泌型免疫球蛋白（sIgA），提高免疫功能；

（３）益生菌可以激活腸黏膜上的巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和自然殺傷（NK）細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子（白細(xì)胞介素、干擾素（IN）－γ等）產(chǎn)生量來(lái)調(diào)控T、B淋巴細(xì)胞分化方向；

（４）益生菌（地衣和枯草芽胞桿菌等）經(jīng)由直接或間接途徑發(fā)揮其免疫佐劑樣作用，增強(qiáng)接種疫苗抗體水平；

（５）益生菌能代謝合成細(xì)菌素類(lèi)物質(zhì)，激活機(jī)體免疫系統(tǒng)。

３.３無(wú)抗發(fā)酵飼料對(duì)生長(zhǎng)肥育豬肉品質(zhì)的影響

本試驗(yàn)中，無(wú)抗發(fā)酵飼料添加可以有效改善育肥豬的肉品質(zhì)，提高了屠宰后pH值、肉色紅度值、肌肉嫩度、肌內(nèi)脂肪含量，降低了滴水損失，試驗(yàn)結(jié)果和前人研究基本一致。肌內(nèi)脂肪是肉質(zhì)的一項(xiàng)重要評(píng)定指標(biāo)，隨著肌內(nèi)脂肪含量的增高，肌束易于分離和咀嚼，肉的嫩度和風(fēng)味得以改善。發(fā)酵飼料能夠減少肌肉剪切力，提高肉質(zhì)嫩度，可能和發(fā)酵飼料可以增加肌內(nèi)脂肪有關(guān)。沈彥鋒等試驗(yàn)主要研究生物發(fā)酵飼料對(duì)魯萊黑豬肥育豬生長(zhǎng)及肉質(zhì)特性的影響發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組豬肉保水能力、瘦肉率、pH顯著高于對(duì)照組，但是試驗(yàn)組肌內(nèi)脂肪數(shù)值上低于對(duì)照組，與本試驗(yàn)不一致。發(fā)酵飼料能夠改善肉品質(zhì)可能與發(fā)酵改變了飼料中的呈味氨基酸和小肽組成密切相關(guān)。張?jiān)朴暗韧ㄟ^(guò)在育肥豬日糧中添加20％袋裝厭氧固態(tài)發(fā)酵飼料，發(fā)現(xiàn)可以降低藥費(fèi)開(kāi)支，尤其是發(fā)酵飼料添加試驗(yàn)組育肥豬不使用任何藥物，徹底解決了藥物殘留問(wèn)題。

綜合本試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，在生長(zhǎng)育肥全階段合理添加使用益生菌發(fā)酵無(wú)抗飼料能提高其生產(chǎn)性能，增強(qiáng)免疫能力，提高屠宰豬肉肉品質(zhì)?？梢詫?shí)現(xiàn)無(wú)抗健康生豬養(yǎng)殖，生產(chǎn)安全優(yōu)質(zhì)無(wú)抗豬肉，可以滿足市場(chǎng)對(duì)豬肉安全和優(yōu)質(zhì)的雙重需求，產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。